Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,749

Ахматова Н.К., Лебединская О.В., Киселевский М.В., Шехмаметьев Р.М., Лебединская Е.А.,Мелехин С.В.

Лектины - сложные белки с углеводсвязывающей активностью. В экспериментах широко используется их способность изменять функциональные свойства различных клеток.

Целью данной работы явилось сравнительное изучение влияния растительных лектинов на цитотоксическую активность (ЦА) мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) периферической крови человека в культурах.

В опытах были использованы следующие растительные лектины: лектин клещевины (ЛК), фасоли (фитогемагглютинин - ФГА) и гороха (ЛГ). МЛ выделяли из стабилизированной гепарином периферической крови 20 здоровых доноров. Кровь, разведенную средой 199, центрифугировали в градиенте плотности фиколла-урографина. МЛ, образовавшие интерфазное кольцо, собирали пипеткой и трехкратно отмывали в среде 199. Для дальнейшего использования в эксперименте культивировали клетки эритробластного лейкоза К-562 и колоректального рака Соlo в среде RPMI-1640. Для выявления цитотоксической активности МЛ использовали тест восстановления 3- (4,5-диметилтиазол-2-ил) 2,5-дифенилтетразолия бромида (МТТ-тест), являющимся одним из основных методов оценки жизнеспособности и пролиферативной активности клеток. Цитотоксическую активность МЛ определяли на линиях К-562 и Colo. Опухолевые клетки (1´106 в 1 мл) инкубировали в культуральной среде с МЛ в соотношении 1:5 в микропланшетах (используемые концентрации ЛК - 0,01-1,0 мг/мл, а ЛГ и ФГА - 0,1-10,0 мг/мл). Затем в лунки добавляли витальный краситель МТТ и по оптической плотности, измеряемой на мультискане (МS), рассчитывали процент лизиса опухолевых клеток (процент цитотоксичности).

Было выяснено, что при увеличении концентрации ЛК до 0,1 мг/мл наблюдается рост цитотоксической активности МЛ в большей степени по отношению к лейкозным клеткам К-562. Введение же в культуры боле высоких доз (от 0,1 до 1,0 мг/мл) приводило к резкому падению ЦА лимфоцитов. При действии ЛГ самый высокий процент цитотоксичности отмечен при использовании дозы 1,0 мг/мл по отношению к клеткам Colo. Дальнейшее увеличение концентрации вызывало снижение ЦА. При применении ФГА в дозе 0,1 мг/мл цитотоксическая способность МЛ была более выраженной в отношении клеток линии К-562 и в меньшей - Colo. По отношению к клеткам Colo она была самой высокой среди всех лектинов. Близкие показатели отмечены только у ЛГ в концентрации 1,0 мг/мл. В случае применения фитогемагглютинина в оптимальных дозах ЦА мононуклеаров являлась максимальной в отношении клеток обеих опухолевых линий по сравнению с действием ЛК иЛГ. Повышение же дозы ФГА до 10,0 мг/мл приводило к снижению ЦА к клеткам К-562 и еще более значительному - к клеткам Colo.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что применение лектина фасоли - фитогемагглютинина в концентрации 0,1 мг/мл является наиболее эффективным в целях повышения цитотоксической активности мононуклеарных лейкоцитов периферической крови человека в условиях культурального роста.