В настоящее время лектинами принято считать сложные белки с углеводсвязывающей активностью, которая обеспечивается карбогидрат - распознающим доменом. Одним из эффектов лектинов является свойство проявлять митогенную активность.
Цель данной работы - сравнительное изучение влияния растительных лектинов на митотическую активность мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) периферической крови человека в культурах.
Для этого были использованы лектины клещевины (ЛК), фасоли (фитогемагглютинин - ФГА) и гороха (ЛГ). МЛ выделяли из стабилизированной гепарином периферической крови 20 здоровых доноров. Кровь, разведенную средой 199, центрифугировали в градиенте плотности фиколла-урографина. Мононуклеарные лейкоциты, образовавшие интерфазное кольцо, собирали пипеткой и трехкратно отмывали в среде 199. Оценку жизнеспособности и митотической активности МЛ проводили с использованием морфологического теста (реакции бласттрансформации лимфоцитов - РБТЛ) традиционным способом в стерильных условиях. Среду с клеточной взвесью вносили в лунки культурального планшета по 1 мл в лунку, затем добавляли один из митогенов в концентрации от 0,005 до 0,02 мг/мл. После 72-часовой инкубации из осадка клеточной суспензии готовили мазки и окрашивали их азуром II и эозином по Романовскому-Гимза. Подсчитывали количество бластных клеток на 500 клеточных форм. Результат выражали как индекс стимуляции (ИС), представляющий собой отношение процента бластных клеток в стимулированной митогеном культуре лимфоцитов к проценту бластных форм в контроле без добавления митогена.
Оценка пролиферативной активности мононуклеарных лейкоцитов периферической крови человека при культивировании их с лектином гороха и с лектином клещевины показала, что дозы от 0,005 до 0,015 мг/мл на порядок повышали содержание бластных форм в культурах по сравнению с контролем и наблюдался экспоненциальный рост ИС в этих пределах в зависимости от концентрации митогенов. Жизнеспособность МЛ составляла 95-99%. Однако повышение дозы ЛГ и ЛК до 0,02 мг/мл приводило к снижению уровня ИС в 2 раза - при введении лектина гороха и почти в 3 раза - при введении лектина клещевины. При этой концентрации ЛГ процентное содержание бластных клеток не изменялось, а введение ЛК приводило к заметному падению их числа. При культивировании с фитогемагглютинином жизнеспособность мононуклеарных лейкоцитов также была в пределах 95-99%. При введении в культуры ФГА в дозах от 0,005 до 0,015 мг/мл содержание бластных клеток было значительно выше, чем при добавлении лектина гороха и лектина клещевины в этих же концентрациях. Самый высокий показатель ИС и наибольшее количество бластных форм отмечены при использовании в опыте максимальной из исследуемых доз ФГА (0,02 мг/мл).
Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что применение лектина фасоли - фитогемагглютинина является наиболее эффективным в целях повышения митотической активности мононуклеарных лейкоцитов периферической крови человека в условиях культурального роста.