Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,749

NUCLEIC ACIDS CONTENT IN THE ENDOMETRIUM OF SOFS IN THE NORM AND UNDER THE SHARP INFLAMMATORY PROCESS

Сеин О.Б., Трубников Д.В., Меринова М.В.
On the basis of biochemical studies there was obtained a new information about functioning of nucleic acids and the speed of their autolyse in the endometrium of sofs in the norm and under the sharp inflammatory process.

До настоящего времени в изучении физиологии размножения сельскохозяйственных животных остаются мало выясненными вопросы корреляции и взаимодействия всех систем организма в различные периоды репродуктивного процесса. Изучение закономерностей репродукции животных на основе современных методик, выяснение взаимосвязи отдельных интерьерных показателей при размножении дает возможность расширить наши знание в этой области биологической науки.

Известно, что у самок стадии полового цикла сопровождаются комплексом морфологических и биохимических «сдвигов», которые наиболее отчетливо проявляются со стороны эндометрия. Именно в нем происходят характерные изменения, отражающие функциональную активность гипоталамо - гипофизарно - гонадной системы, обеспечивающей регуляцию полового цикла. Посредством этих физиологических изменений половой аппарат самки подготавливается к восприятию оплодотворяемой яйцеклетки. В то же время возникновение даже незначительных патологических нарушений в эндометрии может стать препятствием для оплодотворения яйцеклетки и имплантации зиготы.

Одним из факторов, вызывающих нарушения функциональной активности эндометрия, являются воспалительные процессы, которые сопровождаются не только морфо - функциональными, но и биохимическими изменениями в тканях матки.

В настоящее время отечественными и зарубежными исследователями накоплено достаточное количество данных об этиологии и патогенезе послеродовых заболеваний у свиноматок, в том числе и послеродовых эндометритов. Однако сведения о содержании нуклеиновых кислот в тканях эндометрия в динамике полового цикла при воспалительных процессах в матке свиноматок немногочисленны и во многих случаях противоречивы.

Учитывая актуальность обозначенной проблемы, целью настоящей работы являлось изучение содержания нуклеиновых кислот и скорости их аутолиза в эндометрии свиноматок в норме и при остром воспалительном процессе.

Экспериментальную часть работы проводили в условиях научно-исследовательской лаборатории кафедры терапии и акушерства Курской государственной сельскохозяйственной академии, учебно-опытного хозяйства Курской ГСХА и подсобного хозяйства Курской атомной станции.

Объектом исследований являлись свиноматки крупной белой породы. Животные подбирались по принципу аналогов с учетом возраста, стадии полового цикла и характера воспалительного процесса.

В опытах использовали животных от шестимесячного до двухлетнего возраста. Свиноматки содержались в типовых свинарниках в соответствии с зоогигиеническими требованиями. Материалом для исследования служили матки свиноматок, которые отбирались при убое в убойном цехе свинокомплекса подсобного хозяйства Курской АЭС. При осмотре половых органов устанавливали стадии полового цикла (по состоянию яичников) и характер воспалительного процесса. Из рогов матки отбирали маточное содержимое для бактериологической оценки, фрагменты стенки матки с целью проведения гистологического и гистохимического анализов для биохимических исследований использовали навеки эндометрия по 100 мг.

В ходе выполнения работы применяли комплекс методов. Гистологические исследования проводили по общепринятой схеме: фиксация материала в жидкости Карнуа, обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации и ксилоле, заливка в парафин, приготовление парафиновых срезов. Окрашивание препарата гематоксилин - эозином. При микрокопировании препаратов применяли окуляр-микрометр для измерения гистологических объектов.

Для гистохимического анализа использовали метод раздельного выявления ДНК и РНК: готовили парафиновые срезы по указанной выше схеме, часть из них (контроль) помещали в растворы ДНК-азы и РНК-азы на 1 час при 37˚С. Опытные и контрольные срезы окрашивали смесью двух основных красителей - метиловым зеленым и пиронином по Браше.

Количественное содержание РНК и ДНК в навеке слизистой оболочки матки устанавливали методом двухволновой спектрофотометрии в УФ спектре (Шмидт, Тангаузер, 1958). Расчет количества нуклеиновых кислот проводили по формуле, предложенной Спириным.

Активность нуклеаз (дезоксирибонуклеазы и рибонуклеазы) определяли опосредованно по уменьшению содержания нуклеиновых кислот в гомогенате эндометрия в процессе инкубирования в 0,2 М натрий-ацетатном буфере при рН 5,2. Полученные в ходе выполнения работы данные подвергались биометрической обработке на ПЭВМ с использованием прикладных программ.

Сравнительный анализ содержания нуклеиновых кислот в тканях эндометрия свиноматок от 6- до 24-месячного возраста показал, что их уровень не остается постоянным (рис. 1). В отношении ДНК, нами отмечено наибольшее ее содержание в эндометрии свиноматок 6-8-месячного возраста (38,62±0,92 - 42,82±1,34 мкг Р), у животных 9-месячного возраста и старше количество ДНК находилось примерно на одинаковом уровне (30,81±0,79 - 32,29±0,74 мкг Р).

p

Рисунок 1. Содержание РНК и ДНК в эндометрии свиноматок разного возраста

У свинок 6-месячного возраста регистрировалось наибольшее количество РНК в тканях эндометрии (111,96±1,34 мкг Р). В эндометрии 9- и 15-месячных свиноматок содержание этой нуклеиновой кислоты снижалось и составляло соответственно 104,82±2,11 и 97,82±3,29 мкг Р. В 18 месяцев отмечено возрастание количества РНК в эндометрии до 102,34±1,79 мкг Р, а в последующие периоды снижение до 84,47±1,65 мкг Р.

Известно, что в течение полового цикла в эндометрии самок происходят как пролиферативные, так и биохимические «сдвиги». Определенные изменения были выявлены нами со стороны содержания нуклеиновых кислот (рис. 2). Так, в стадии возбуждения полового цикла отмечался максимальный уровень РНК - 109,54±2,83 мкг Р. В стадии торможения количество РНК достоверно снижалось (Р<0,05) и составляло 96,72±3,04 мкг Р, а во время стадии уравновешивания вновь повышалось на 6,12±0,31 мкг Р.

p

Рисунок 2. Содержание ДНК, РНК в эндометрии свиноматок в динамике полового цикла

Колебания количества ДНК в эндометрии в стадии возбуждения и торможения полового цикла были недостоверными (Р<0,05), находились практически на одинаковом уровне с незначительным увеличением в стадии возбуждения (41,46±1,58 мкг Р). В стадии уравновешивания содержание ДНК достигало минимального значения - 36,54±0,66 мкг Р (Р<0,05).

Результаты сравнительного анализа содержания нуклеиновых кислот в эндометрии свиноматок свидетельствуют о том, что в период стадии возбуждения уровень ДНК в эндометрии больных свиноматок составлял 38,69±2,04 мкг Р, а в стадии торможения и уравновешивания он снижался соответственно до 37,15±0,38 и 35,29±0,91 мкг Р. При этом у здоровых животных содержание ДНК в соответствующие периоды было достоверно (Р<0,05) выше (36,54±0,66 мг - 41,46±1,58 мкг Р), чем у больных свиноматок.

Что касается РНК, то ее содержание в эндометрии больных животных колебалось в пределах 86,47±3,17 - 93,64±3,02 мкг Р, что относительно здоровых свиноматок (96,72±3,04 - 109,54±2,83 мкг Р) было достоверно ниже (Р<0,05).

Проведенные нами гистологические исследования также подтвердили, что содержание нуклеиновых кислот в эндометрии свиноматок не остается постоянным как в период половой цикличности, так и при воспалительном процессе. Так, для стадии возбуждения полового цикла характерным являлось повышение концентрации РНК в цитоплазме клеток эпителия и выраженное «скопление» ДНК в их ядрах. В стадии торможения и уравновешивания концентрация нуклеиновых кислот, особенно РНК, в цитоплазме клеток железистого эпителия снижалась.

В эндометрии свиноматок больных острым послеродовым эндометритом при гистохимическом исследовании была выявлена высокая концентрация РНК в эндотелиальных клетках капилляров, а в эпителии эндометрия отмечалась неравномерная зернистость ДНК эпителиоцитов и низкое содержание РНК в цитоплазме клеток.

Результаты исследования аутолиза нуклеиновых кислот показали, что в стадии торможения полового цикла уровень аутолиза ДНК достигал максимального значения (0,225±0,056 мкг Р/ч), в стадии уравновешивания скорость аутолиза снижалась до 0,164±0,03 мкг Р/ч, а в стадии возбуждения составляла 0,132±0,012 мкг Р/ч.

Аутолиз РНК имел аналогичную динамику изменения в ходе полового цикла, однако он был более выраженным. Так, наибольшая скорость аутолиза РНК отмечалась в стадии торможения - 8,48±0,14 мкг Р/ч, а в стадии уравновешивания и возбуждения она снижалась соответственно до 7,04±0,13 и 6,79±0,16 мкг Р/ч.

В ходе проведенных исследований было установлено, что интенсивность аутолиза нуклеиновых кислот в эндометрии больных свиноматок была выше, чем у здоровых животных. Так, в стадии возбуждения скорость аутолиза ДНК составляла 0,247±0,021 мкг Р/ч. Во время стадии торможения она была максимальной (0,395 ± 0,053 мкг Р/ч), а в период стадии уравновешивания вновь уменьшалась, достигая 0,293±0,046 мкг Р/ч.

Интенсивность аутолиза РНК в период исследований находилась в пределах 8,11±0,61 - 9,68±0,38 мкг Р/ч. При этом максимального значения скорость аутолиза достигала в стадии торможения, а минимального - в стадии возбуждения.

Таким образом результаты наших исследований содержания нуклеиновых кислот и скорости их аутолиза в эндометрии свиноматок в динамике полового цикла и при остром послеродовом эндометрите расширяют и конкретизируют существующие представления о системности функционально-морфологических перестроек в репродуктивных органах самок в период половой цикличности и при воспалительных процессах. Выявленные выявленные интерьерные показатели могут быть использованы в целенаправленной работе при изыскании новых средств борьбы с эндометритами у свиноматок.

С использованием биохимических и гистохимических исследований получены новые данные о содержании и распределении в тканях эндометрия свиноматок ДНК и РНК в различные стадии полового цикла и при остром эндометрите. Установлено, что скорость аутолиза нуклеиновых кислот в эндометрии свиноматок изменяется в зависимости от стадии полового цикла и наличия воспалительного процесса.