Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,749

WORKING OUT AND VALIDATION CHARACTERISTICS OF THE METHOD OF QUANTITATIVE MAINTENANCE FLAVONOIDS IN PHYTOGEL OF THE REPARATIVE ACTION

Volodina T.A. 1 Penyevskaya N.А. 1 Ushakova L.S. 2 Lyashenko S.S. 2
1 Omsk State Medical Academy
2 Pyatigorsk Medical and Pharmaceutical Institute
The phytogel of the reparative action was developed. This gel containing quality of operating components thick extracts of thyme, glycyrrhiza, chestnut, nettle, oil extract of hypericum, aloe juice and dihydroquercetin. Set the contents of flavonoids in terms of dihydroquercetin – biologically active substances that provide a healing effect in the sample of developed fitogeli, which amounted to 0,72 ± 0,04 %. Quantitativ definitions of flavonoids were spent with to help of method of differential spectrophotometry in recalculation on dihydroquercetin. The validation of the developed technique was carried out to the parameters of linearity (linear regression equation is: y = (3,08 ± 0,13)x), repeatability (relative standard deviation was 5 %) and accuracy (average percentage of detectability was of 100,06 %). The results showed that the technique allows to objectively assess the quality of the phytogel with extracts of thyme, glycyrrhiza, chestnut, nettle, oil extract of hypericum, aloe juice and dihydroquercetin.
phytogel
extract
thyme
glycyrrhiza
nettle
chestnut
hypericum
aloe
dihydroquercetin
1. Bogoyavlenskiy A.P., Aleksyuk P.G., Turmagambetova A.S., Berezin V. E. Aktualnye problemy standartizatsii fitopreparatov i rastitelnogo syrya dlya ikh proizvodstva // Fundamentalnye issledovaniya. 2013, no 6 (chast 5), pp. 1184–1187.
2. Vasyakina, K.A., Kurkina А.V. Repeshok aptechnyi – perspectivnyi syrevoi istochnik gepatoprotectorov. Izvestia Samarskogo nauchnogo tsentra RAN. 2012. Vol. 14, no. 1(7), pp. 2184–2186.
3. Meshkovskiy A.P. Validaciya analiticheskich metodov. Sovremennie trebovaniya k organizacii I deyatelnosti kontrolno-analicheskih laboratoriiy otdelov kontrolya kachestva farmatsevticheskih predpriyatii: sbornik. Moscow, 2002, pp. 26–30.
4. Markarjan A.A., Dargaeva T.D., Nikolaev S.M., Mondodoev A.G. Organizacionno-metodicheskie aspekty kliniko- jeksperimental’nyh issledovanij novoj BAD. MZ RF Problemy upravlenija zdravoohranenija. Moscow, Izd. Proftek, 2003, no. 4 (11), pp. 83–88.
5. Mukeshwar Pandey, Mousumi Debnath, Shobit Gupta, Surender K. Chikara Phytomedicine: An ancient approach turning into future potential source of therapeutics. Journal of Phar-macognosy and Phytotherapy. 2011. Vol. 3, no. 3, pp. 27–37.
6. Simaan J.A. Herbal medicine, what physicians need to know. Lebanese Med. J. 2009. Vol. 57, pp. 215–217.
7. Wagner H. Natural products chemistry and phytomedicine in the 21st century: New developments and challenges. Pure Appl. Chem. 2005. Vol. 77, no. 1, pp. 1–6.

Мировой объем продаж лекарственных средств на растительной основе в 2011 г. оценивался на уровне 26 млрд долларов. При этом использование фитопрепаратов на мировом рынке характеризуется тенденцией к росту, и в ближайшие 10 лет доля лекарственных средств растительного происхождения в общих объемах потребления фармацевтических препаратов может достигнуть 60 % [1, 4–7]. По данным государственного реестра лекарственных средств из мягких лекарственных форм для наружного применения препараты растительного происхождения с репаративными свойствами составляют всего 0,5 %, а производителями этих препаратов являются Грузия, Франция, Германия и Индия, что говорит об отсутствии на фармацевтическом рынке отечественных аналогов таких препаратов. Нами разработан фитогель, сочетающий экстракты чабреца, солодки, крапивы, каштана, зверобоя, сок алоэ и дигидрокверцетин и обеспечивающий репаративное действие.

Цель исследования. Разработать методику количественного определения суммы флавоноидов в фитогеле и определить ее валидационные характеристики.

Результаты исследования и их обсуждение

Основными действующими веществами экстрактов чабреца, солодки, зверобоя, каштана являются флавоноиды. При разработке методики количественного определения суммы флавоноидов использовали реакцию комплексообразования с раствором алюминия хлорида. В условиях комплексообразования наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов, в частности, флавонов и флавонолов, который обнаруживается в УФ-спектре в виде максимума поглощения в области 390 ± 5 нм, что находит применение в методе дифференциальной спектрофотометрии [2].

Для количественного определения суммы флавоноидов к 0,3 г фитогеля (точная навеска) прибавляли 20 мл спирта этилового 96 % и интенсивно перемешивали в течение 10 минут, полученный раствор отфильтровывали в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили объем раствора спиртом этиловым 96 % до метки (раствор А).

1 мл раствора А помещали в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляли 1 мл спиртового раствора алюминия хлорида и доводили объем раствора спиртом этиловым 96 % до метки. В результате комплексообразования исследуемый раствор окрашивался в ярко-желтый цвет. Через 40 минут снимали оптическую плотность раствора на спектрофотометре СФ 2000 при длине волны 390 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Для приготовления раствора сравнения в мерную колбу вместимостью 25 мл прибавляли 1 мл раствора А, 1 каплю кислоты уксусной разведенной и доводили спиртом этиловым 96 % до метки.

Параллельно измеряли оптическую плотность раствора СО дигидрокверцетина в тех же условиях.

Содержание суммы флавоноидов в фитогеле (в пересчете на дигидрокверцетин) вычисляли по формуле:

Eqn116.wmf

где Ах, Аст – соответственно оптическая плотность анализируемого раствора и раствора СО дигидрокверцетина; аст – масса дигидрокверцетина, взятая для приготовления раствора СО, г; ах – масса фитогеля, взятая на анализ, г.

Дифференциальный спектр поглощения суммы флавоноидов фитогеля представлен на рис. 1.

pic_54.tif

Рис. 1. Дифференциальный УФ-спектр поглощения суммы флавоноидов фитогеля

Количественное содержание суммы флавоноидов в пересчете на дигидрокверцетин в фитогеле составило 0,72 ± 0,04 %.

Валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в фитогеле проводилась по линейности, сходимости и правильности [3].

Определение линейности проводили на 5 уровнях концентраций от ожидаемого содержания суммы флавоноидов в пересчете на дигидрокверцетин в фитогеле. Растворы готовили путем разбавления аликвоты и увеличения аликвоты для измерения количественного содержания суммы флавоноидов. Далее строили градуировочный график зависимости оптической плотности от массы фитогеля (табл. 1, рис. 2). Критерием приемлемости методики является коэффициент корреляции, величина которого должна быть не ниже 0,99 [3].

Как следует из представленного графика, все экспериментальные точки находятся вблизи линии тренда. Уравнение линейной регрессии имеет вид: у = (3,08 ± 0,13)х. Значение коэффициента корреляции, вычисленное при помощи программы Microsoft Excel, составило 0,9939.

Сходимость методики определяли на образце фитогеля в 6 повторностях. Критерий приемлемости выражался величиной относительного стандартного отклонения, которое составляло 5,0 % (табл. 2).

Таблица 1

Определение линейности методики количественного определения суммы флавоноидов в фитогеле

Масса фитогеля, г

0,0312

0,0461

0,0624

0,0714

0,0857

0,0999

Оптическая плотность А

0,086

0,136

0,192

0,213

0,277

0,306

pic_55.tif

Рис. 2. Градуировочный график зависимости оптической плотности (А) от массы фитогеля

Таблица 2

Определение сходимости методики количественного определения суммы флавоноидов в фитогеле

Повторность

Содержание суммы флавоноидов в фитогеле, %

1

0,68

2

0,70

3

0,74

4

0,72

5

0,77

6

0,69

Среднее значение

0,72

Относительное стандартное отклонение (RSD, %)

5,0

Правильность методики устанавливали путем измерения количественного содержания суммы флавоноидов в пересчете на дигидрокверцетин в растворах, полученных путем добавления определенного количества стандарта к исследуемому раствору. Критерием приемлемости является средний процент восстановления при использовании растворов заданных концентраций, скорректированный на 100 %, средняя величина которого должна находиться в пределах 100 ± 5 %. Результаты установления правильности спектрофотометрической методики определения суммы флавоноидов в фитогеле представлены в табл. 3.

В разработанной нами методике процент восстановления находился в пределах от 98,76 до 101,11 %, его средняя величина составила 100,06 % (табл. 3).

Таблица 3

Результаты установления правильности методики количественного определения суммы флавоноидов в фитогеле методом добавок

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на дигидрокверцетин, мг

Добавлено СО дигидрокверцетина, мг

Рассчитанное содержание, мг

Найденное содержание, мг

Выход, %

1,014

0,0525

1,0665

1,0691

100,24

1,014

0,0525

1,0665

1,0533

98,76

1,014

0,0525

1,0665

1,0709

100,41

1,014

0,1050

1,1190

1,1189

99,99

1,014

0,1050

1,1190

1,1192

100,02

1,014

0,1050

1,1190

1,1187

99,97

1,014

0,2100

1,2240

1,2244

100,03

1,014

0,2100

1,2240

1,2376

101,11

1,014

0,2100

1,2240

1,2237

99,98

Среднее значение выхода – 100,06 %

Таким образом, правильность методики количественного определения суммы флавоноидов в фитогеле соответствует предъявляемым требованиям [3].

В ходе анализа установлено: методика легко воспроизводима, доступна, не требует дорогостоящих реактивов и позволяет объективно оценивать качество исследуемого фитогеля.

Выводы

1. Методом дифференциальной спектрофотометрии было установлено количественное содержание суммы флавоноидов в фитогеле.

2. Установлены параметры линейности, сходимости и правильности применяемой методики.

Рецензенты:

Власова И.В., д.х.н., доцент, профессор кафедры аналитической химии, ФГБОУ ВПО «Омский государственный университет им. Ф.M. Достоевского», г. Омск;

Андреева И.Н., д.фарм.н., профессор кафедры «Туризм», Институт сервиса и технологий, филиал, ФГОУ ВПО «ДГТУ», г. Пятигорск.

Работа поступила в редакцию 17.10.2013.