В совместных исследованиях кафедры фармацевтической технологии и микробиологии АГМУ в соответствии с принципами конструирования лекарственных препаратов для лечения заболеваний пародонта был предложен состав экспериментального стоматологического геля, который получил условное название «Эстофит Дента». Биофармацевтические и микробиологические исследования показали, что стоматологический гель «Эстофит Дента» обеспечивает пролонгированное высвобождение бензокаина и проявляет выраженный антимикробный эффект в отношении клинических штаммов грампозитивных микроорганизмов: коагулазоположительных Staphylococcus aureus, коагулазоотрицательных Staphylococcus epidermidis; грамнегативных палочек Klebsiella pneumonia; дрожжеподобных грибов Candida albicans; умеренное антибактериальное действие в отношении Echerichia coli [2].
Разработка рациональной технологии, составление технологической схемы производства, определение критериев оценки качества, методик и параметров стандартизации являются обязательными этапами создания лекарственных препаратов.
Цель данной работы – разработка технологии и определение показателей качества экспериментального препарата «Эстофит Дента».
Материалы и методы исследования
Объект исследования – экспериментальный стоматологический гель «Эстофит Дента» следующего состава: бензокаина (ФС 42-3024-00) 3,0; календулы настойки (ФС 42-1948-82) 40,0; глицерина (ФС 42-2202-99) 10,0; аквасорба А380 (Hercules, Франция) 1,0; воды очищенной (ФС 42-0324-09) до 100,0.
Технологию экспериментального стоматологического геля «Эстофит Дента» разрабатывали в соответствии с рекомендациями ГОСТа 52249-2009 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств» и требованиями ОСТа 64-02-003-2002 «Продукция медицинской промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, согласования и утверждения» [3, 9].
Нормы качества формировали в соответствии с ОСТом 91 500.05.001–00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» [8].
Требования к упаковке, маркировке и транспортированию разрабатывали в соответствии с ГОСТом 17768-90, ГОСТом 28303-89 и ТУ 64-7-678-90 «Тубы и бушоны для медицинских мазей. Технические условия» [5, 6].
Показатель «Описание» оценивали органолептически.
Подлинность препарата определяли по бензокаину и основной группе БАВ календулы настойки (флавоноидам) с использованием метода спектроскопии на спектрофотометре Cary-50, а также с помощью химических реакций, дающих наиболее выраженный аналитический сигнал на анализируемые вещества.
рН водного извлечения устанавливали потенциометрически на иономере универсальном ЭВ-74, пробоподготовку выполняли по ГОСТу 29188.2-91 «Изделия косметические. Метод определения водородного показателя, рН» [4].
Испытание на микробиологическую чистоту проводили на базе Барнаульского филиала ФГУЗ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии по железнодорожному транспорту по ГФ XII, выпуск 2009 года, ОФС 42-0067-07 «Микробиологическая чистота» [7].
Количественное содержание бензокаина в составе геля определяли спектрофотометрически, измеряя оптическую плотность спиртового раствора геля на спектрофотометре Cary-50 при длине волны 292 ± 2 нм.
В качестве метода количественного определения флавоноидов в анализируемом составе применяли метод дифференциальной спектрофотометрии, в основе которого лежит реакция комплексообразования флавоноидов с алюминия хлоридом, при длине волны 407 ± 2 нм.
Статистическую обработку результатов осуществляли с использованием встроенных функций программы Excel из пакета Office XP (Microsoft, США).
Результаты исследования и их обсуждение
Принимая во внимание современные требования к производству лекарственных препаратов, оборудование, помещения, персонал должны быть аттестованы в соответствии с требованиями GMP, все этапы технологического процесса подлежат контролю и валидации [3].
Технология получения стоматологического геля «Эстофит Дента» заключалась в следующем: в смеситель, снабженный мешалкой якорного или рамного типа с подключением к системе обеспечения вакуумирования, загружали воду очищенную, затем при включенной мешалке 60–70 об/мин добавляли отвешенное количество аквасорба А 380 и перемешивали в течение 20–30 мин, оставляли для набухания на 1 ч при выключенной мешалке. После образования однородного геля добавляли глицерин при постоянном перемешивании при 20–30 об/мин, получали основу геля, которую анализировали по реологическим параметрам. В емкости, предотвращающей испарение, растворяли бензокаин в отмеренном количестве календулы настойки и подавали в смеситель. Смешивали основу геля, раствор бензокаина в календулы настойке и перемешивали до однородной гелеобразной массы в течение 40–60 мин. Гель с помощью насоса передавали на линию упаковки, где его расфасовали по 10,0 в алюминиевые тубы. На основании технологии была разработана технологическая схема производства геля «Эстофит Дента» (рисунок).
Качество полученного препарата оценивали по показателям: описание, подлинность, масса содержимого упаковки, рН водного извлечения, микробиологическая чистота, количественное определение. Дано описание внешнего вида препарата, который представляет собой однородную массу, не содержащую посторонних примесей, светло-коричневого или светло-желтого цвета.
Для подтверждения подлинности календулы настойки в составе геля снимали УФ-спектры хелатов флавоноидов настойки с алюминия хлоридом на спектрофотометре Cary-50 в интервале длин волн от 230 до 500 нм, при этом установлено наличие максимума поглощения при длине волны 407 ± 2 нм, а также проводили реакцию на цианидиновую пробу. Подлинность бензокаина устанавливали на основании УФ-спектра спиртового раствора геля в интервале длин волн от 300 до 500 нм (максимум поглощения при длине волны 292 ± 2 нм) и по реакции образования йодоформа после щелочного гидролиза на наличие этоксигруппы.
рН водного извлечения в соотношении 1:10 измеряли на приборе «иономер универсальный ЭВ-74», при этом водородный показатель составил 6,5 ± 0,13.
Микробиологическую чистоту экспериментального стоматологического геля «Эстофит Дента» определяли по методикам ГФ ХII изд. ОФС 42-0067-07 «Микробиологическая чистота» на базе Барнаульского филиала ФГУ «Федеральный центр гигиены и эпидемиологии по железнодорожному транспорту». Результаты исследований показали, что общее число аэробных бактерий и грибов (суммарно) составляет менее 1×101 КОЕ/г, содержание энтеробактерий – менее 101 КОЕ/г. Кроме того, в препарате не обнаружены бактерии Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa (в 1 г препарата). Полученные результаты позволили сделать заключение о соответствии стоматологического геля «Эстофит Дента» требованиям ГФ XII изд. ОФС 42-0067-07 «Микробиологическая чистота», предъявляемым к лекарственным средствам категории 2.
Технологическая схема получения геля «Эстофит Дента» (контрольные точки: Кт – контроль технологический, Км – контроль микробиологический, Кх –контроль химический)
Количественное определение проводили по разработанным нами методикам [1]. Валидацию разработанных ранее методик осуществляли согласно проекту ОФС 42-0113-09 «Валидация аналитических методик» по следующим показателям: линейность, аналитическая область, правильность, прецизионность (табл. 1).
Таблица 1
Валидационная оценка методик количественного определения флавоноидов и бензокаина методом СФМ
|
Критерий валидации |
Полученное значение |
Рекомендуемое значение |
|
|
Флавоноиды |
бензокаин |
||
|
Линейность |
|||
|
Коэффициент корреляции |
0,9994 |
0,9995 |
0,9900 |
|
Уравнение регрессии |
y = 0,70348х + 0,00315 |
y = 1,9066х + 0,01004 |
Y = ax + b |
|
Аналитическая область методики |
|||
|
Процент от содержания в составе геля |
25-125 |
50-150 |
80-120 |
|
Повторяемость (сходимость) |
|||
|
Относительное стандартное отклонение (RSD), % |
5,22 |
2,57 |
не более 10 % |
|
Промежуточная (внутрилабораторная) прецизионность |
|||
|
Относительное стандартное отклонение (RSD), % |
6,03 |
3,59 |
не более 15 % |
|
Правильность |
|||
|
Открываемость, % |
95,71-102,84 |
97,10-99,70 |
95-105 |
Полученные данные валидационных исследований свидетельствуют, что анализируемые методики количественного определения флавоноидов (в пересчете на рутин) и бензокаина могут быть использованы для оценки качества геля для наружного применения «Эстофит Дента», так как экспериментальным путем установлены параметры линейности (R2 = 0,9994 и 0,9995), диапазона применения (от 25 до 125 % для флавоноидов и от 50 до 150 % для бензокаина), повторяемости (RSD = 5,22 и 2,57 %), прецизионности (RSD = 6,03 и 3,59 %) и правильности (
= 99,42 ± 1,31 и 98,25 ± 0,51 %).
На основании исследований в соответствии с регламентируемыми показателями ОСТа 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» установлены нормы качества экспериментального препарата «Эстофит Дента» (табл. 2). Результаты проведенных исследований использованы при разработке проекта ФСП «Эстофит Дента», гель для местного применения, стоматологический.
Таблица 2
Нормы качества экспериментального препарата «Эстофит Дента», гель для местного применения, стоматологический
|
Наименование показателя |
Методы анализа |
Норма |
|
|
Описание |
Визуально, органолептически |
Однородная масса, не содержащая посторонних примесей, допускается наличие воздушных пузырьков. Светло-коричневого или светло-желтого цвета |
|
|
Подлинность |
Бензокаин |
УФ-спектроскопия |
УФ-спектр поглощения спиртового раствора геля в области от 230 до 500 нм должен иметь максимум поглощения при длине волны 292 ± 2 нм |
|
Реакция образования йодоформа после щелочного гидролиза на наличие этоксигруппы |
Желтый осадок йодоформа с характерным запахом |
||
|
Календулы настойка |
УФ-спектроскопия |
УФ-спектр поглощения спиртового раствора геля в присутствии алюминия хлорида в области от 300 до 500 нм должен иметь максимум поглощения при длине волны 407 ± 2 нм |
|
|
Цианидиновая проба |
Красное окрашивание |
||
|
Масса содержимого упаковки |
ГОСТ 17768-90 |
10,0 ± 0,5 г |
|
|
рН водного извлечения |
ГОСТ 29188.2-91 |
5,5 – 7,5 |
|
|
Микробиологическая чистота |
ГФ XII изд., ОФС 42-0067-07 |
Категория 2 |
|
|
Количественное определение |
|||
|
Бензокаин |
Спектрофотометрия |
Содержание бензокаина 3,0 ± 0,15 % |
|
|
Содержание суммы флавоноидов |
Дифференциальная спектрофотометрия |
Содержание флавоноидов в пересчете на рутин не менее 0,025 % |
|
Выводы
1. Разработана технология экспериментального препарата «Эстофит Дента», гель для местного применения, стоматологический.
2. Установлены нормы качества геля «Эстофит Дента» и валидационные характеристики методик количественного определения бензокаина и флавоноидов в пересчете на рутин.
Рецензенты:
Шарахова Е.Ф., д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой управления и экономики фармации, ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России, г. Барнаул;
Федосеева Л.М., д.фарм.н., профессор, зав. кафедрой фармацевтической химии с курсом органической и токсикологической химии, ГБОУ ВПО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России, г.Барнаул.
Работа поступила в редакцию 08.10.2013.