Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,749

USE OF IMMUNOMODULATING THERAPY IN TREATMENT OF PATIENTS WITH CHRONIC ASSOCIATED ABOUT THE VIRUS EPSTEINA-BARR BY THE INFECTION

Markelova E.V. 1 Krasnitskaja A.S. 1 Borovskaya N.A. 1 Shitihina A.S. 1
1 GBOU VPO «The Vladivostok state medical university» Ministries of health and social development Russia Federation
Work purpose: contents research cytokines at patients with the chronic tonsillitis associated with the WEB INFECTION, before the carried-out immunotropny treatment. Methodology of carrying out work: 73 persons are included in research with the diagnosis chronic tonsillitis. At all patients the material fence from a pharynx on microflora and sensitivity to antibiotics is made, and also by a PTsR method determined DNA of a virus of Epstein – Barrel. Patients were divided into two groups: the 1st group (26 people) received besides the standard scheme of treatment immunomodulating therapy reaferon-ES-lipintom, the 2nd group (27 people) received standard treatment. As control 20 people – almost healthy volunteers comparable on a floor and age served. Method of the immunofermental analysis (IFA) determined EBV-VCA-IgM, by EBV-EA-IgG, EBV-NA-IgG in blood serum. Definition cytokines (IL-1β, IL-17, IL-10, IL-4,) in a saliva carried out by means of specific reactants of firm «R& D Diagnostic. Inc» a method a sandwich version of the tverdofazny immunofermental analysis (IFA), the maintenance of secretary Ig A determined (USA) in a saliva by a method of tverdofazny IFA with application of specific reactants of JSC Vektor-Best (Russia). Statistical processing of results carried out by means of the computer Microsoft Exel programs. Results of work: At comparison of the local cytokines status of two studied groups the following distinctions were revealed: level of IL-10 remained high from 1 to 7 days of research at the patients who were receiving reaferon-ES-lipint. IL-4 level considerably raised at the height of a disease at these patients. IL-17 indicators authentically decreased in a rekonvalestsentsiya. Conclusions: preparation applications reaferon-ES-lipint in out-patient practice confirmed expediency of its use and efficiency of a preparation in complex treatment of the chronic tonsillitis associated with the WEB INFECTION that proves to be true the received kliniko-laboratory data, including data of tsitokinovy research.
a chronic tonsillitis
a virus Epsteina-Barr an infection
reaferon-ES-lipint
1. Zheltova O. I., Starostin N. M., Tikhonov M. A., Leplina O. Yu., Black E.R., Ostanin A.A. Efficiency ronkoleikin in treatment of chronic retsidiviruyushchy infections // Medical immunology 2011. T. 13, no.3. рр. 227–236.
2. Korneychuk L.I., Black N of the Item, Vorontsov A.V. Rehabilitation of patients by chronic tonsillitis under control of indicators of immunity // The Pacific medical magazine – 2003. no. 3. рр. 47–48.
3. Kunelsky N.L., Izotov G. N., Luchshev I.A., Voloshin I.A., Artemyev M. E., Kudryavtsev Yu.S. Sochetanny local therapy at diseases of a stomatopharynx // The Messenger of otorhinolaryngology 2008. no. 2. рр. 62–66.
4. MarkelovaE.V., KostyushkoA.V., KrasnikovV.E. Patogeneticroleofviolations in system of cytokines at infectious and inflammatory desiase // Pacific medical journal 2008. no. 3. pp. 24–29.
5. Simovanyan E.N., Denisenko V. B., Sarychev A.M., Grigoryan A.V. A chronic infection of a virus of Epstein-Barre at children: modern aspects of diagnostics and treatment // Consilium medicum: 2006. – Pediatrics no. 2 appendix. pp. 29–35.
6. Fomin V.V., Udimova E.E., Beykin Ya.B., Lagereva Yu.G. Pathogenetic justification of immunokorrigiruyushchy therapy at infectious mononucleosis at children // Children›s infections 2006. no. 3. pp. 23–28.
7. Schwab I.A., Chuykova K.I., Zhuravlyov L.A., Sakharovsky Z.V.Efficiency of application anaferon children›s in complex therapy infectious mononucleosis at children // The Siberian oncological magazine. 2005. no. 13. pp. 32–35.
8. Shestakov I.V., Yushchuk N.D. Modern approaches to Epstein-Barre›s treatment – a virus infection at adults // The Attending physician. 2011. no. 2. pp. 98–100.

Хронический тонзиллит относится к наиболее распространенным заболеваниям верхних дыхательных путей в различных возрастных группах. Причиной хронического тонзиллита чаще бывает вирусная инфекция, которая в дальнейшем сменяется бактериальной [2]. Согласно современным данным, хронический тонзиллит – полиэтиологическое заболевание, в генезе которого играют роль многочисленные факторы, однако причиной обострения воспалительного процесса в глотке чаще является воздействие микроорганизмов. Основными возбудителями является: Streptococcusα-haemolyticus, β- haemolyticus, γ- haemolyticus, Staphylococcusaureus, CNSStaphylococcus, Neisseriaspp., Haemophilusspp, Corynebacteriumspp, грибы рода Candida [3].

Вирусы могут играть роль «протравы», способствующей развитию бактериальной инфекции. Обосновано мнение о том, что инфекция играет основную роль не в возникновении, но в хронизации тонзиллита [4, 5, 6].

В настоящее время много исследований посвящено вирусу Эпштейна-Барр (ВЭБ) в развитии различных воспалительных заболеваний, в том числе и хронического тонзиллита.

ВЭБ обнаруживается у 90–92 % населения земного шара [1]. Важной особенность ВЭБ является избирательное инфицирование В-лимфоцитов через специфический рецептор CD21. Долгое время В-лимфоциты считались единственной мишенью ВЭБ в организме больного. Однако позже было установлено, что инфицируются также клетки эпителия носоглотки и нейтрофилы. Возможно инфицирование Т-лимфоцитов, а также дендритных клеток, несущих на поверхности рецептор CD21 [7, 8].

Иммунные нарушения при хроническом тонзиллите носят комплексный характер, они касаются как клеточного, так и гуморального иммунитета, влекут за собой утяжеление течения, учащение осложнений заболевания.

Как для оптимизации терапии, так и для предупреждения формирования в дальнейшем индуцированного иммунодефицитного состояния для лечения хронического тонзиллита был применен препарат рекомбинантного α-интерферона: реаферон-ЕС-липинт.

Целью нашей работы явилось исследование содержания цитокинов у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией, до и после проведенного иммунотропного лечения.

Материалы и методы исследования

В исследование включено 73 человека (59 женщин и 14 мужчин) с диагнозом «хронический тонзиллит», выставленным на основании жалоб пациентов, анамнестических данных, клинической картины. У всех пациентов произведен забор материала из зева на микрофлору и чувствительность к антибиотикам, а также методом ПЦР определяли ДНК вируса Эпштейна-Барр. Из них у 53 человек диагностирована ВЭБ-инфекция. Пациенты были разделены на две группы: 1-я группа (26 человек) получали помимо стандартной схемы лечения иммуномодулирующую терапию реаферон-ЕС-липинтом, 2-я группа (27 человек) получали стандартное лечение. У всех обследованных пациентов хронический тонзиллит был в стадии обострения, о чем свидетельствовали наличие клинических симптомов, данные анамнеза и объективного осмотра. Больные обследованы в период разгара заболевания (1 день болезни), угасания клинических симптомов (7-й день) и в период реконвалесценции (28-й день). Контролем служили 20 человек – практически здоровых добровольцев, сопоставимых по полу и возрасту.

Для выявления ДНК ВЭБ использовали метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Материалом для выделения ДНК ВЭБ служили кровь, слюна и эпителиальные клетки небных миндалин. Методом иммуноферментного анализа (ИФА) определяли EBV-VCA-IgM, EBV-EA-IgG, EBV-NA-IgG в сыворотке крови. Определение цитокинов (IL-1β, IL-17, IL-10, IL-4) в слюне проводили с помощью специфических реактивов фирмы «R&DDiagnostic. Inc» (США) методом сэндвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), содержание секреторного IgA определяли в слюне методом твердофазного ИФА с применением специфических реактивов ЗАО «Вектор-Бест» (Россия).

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью компьютерных программ MicrosoftExel, Biostat с применением непараметрических методов и корреляционного анализа. Результаты представляли в виде средней арифметической (M ± m). Достоверность различия определяли при p < 0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

У пациентов, получавших реаферон-ЕС-липинт, отмечалось уменьшение продолжительности основных клинических симптомов хронического тонзиллита по сравнению с пациентами 2-й группы. Уже в течение первых суток пациенты отмечали уменьшение болевых ощущений в глотке. Полное исчезновение болевого симптома на 3-й день с момента лечения отметили 86,7 % пациентов основной группы. При фарингоскопии отечность и гиперемия слизистой оболочки глотки, казеозные массы в лакунах исчезли на 4-й день у пациентов, получавших лечение препаратом α-интерферона, и на 7-й день у пациентов с хроническим тонзиллитом вирусной природы, получавших стандартное лечение.

В процессе лечения реафероном-ЕС-липинтом не отмечалось ни одного случая нежелательных побочных эффектов применения препарата.

Исходно до назначения терапии оценка локального цитокинового профиля у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией (табл. 1) позволила установить существенное увеличение уровня провоспалительных цитокинов IL-1β, IL-17 в первые и на 7 сутки исследования с постепенным снижением к 28 дню (p < 0,05). Уровень ИЛ-17 в период реконвалесценции был значительно ниже по сравнению с пациентами 2 группы. Установлено раннее повышение противовоспалительного цитокина IL-10 исходно и в период угасания клинических симптомов с последующим снижением до нормальных величин на 28 сутки (p < 0,05). Причем показатели данного цитокина на 7 день исследования превышали уровень ИЛ-10 у пациентов, получавших стандартное лечение. Уровень IL-4 исходно не отличался от группы контроля, достигал максимально высокого значения на 7-е сутки и сохранялся высоким в период реконвалесценции. Однако в период угасания клинических симптомов у пациентов 2 группы показатели данного цитокина значительно были ниже (p ˂ 0,05).

Таблица 1

Показатели уровня цитокинов у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией, получавших лечение реаферон-ЕС-липинтом, и у людей контрольной группы.

№ п/п

Показатели, пг/мл

Исследуемые группы

Пациенты 1 группы

(n = 26)

Здоровые

(n = 20)

1-й день

7-й день

28-й день

 

1

ИЛ-1β

23,68 ± 2,6*

12,38 ± 2,8*

7,25 ± 2,31

5,04 ± 2,37

2

ИЛ-17

56,72 ± 1,9*

43,60 ± 8,9*

16,18 ± 6,2#

11,1 ± 1,82

3

ИЛ-10

13,47 ± 3,0*

12,29 ± 2,7*#

8,3 ± 0,6

5,31 ± 0,43

4

ИЛ-4

7,8 ± 0,9

11,45 ± 1,2*#

10,4 ± 0,63*

3,33 ± 0,07

Примечание. Статистическая достоверность: с группой контроля – * – p˂0,05; между группами сравнения – # – p˂0,05.

Следовательно, у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией, получавших иммуномодулирующее лечение, в разгар заболевания значительно повышен уровень IL-1β, IL-17, IL-10. При угасании клинических симптомов существенно возрастал уровень IL-10 и IL-4 по сравнению со второй группой, однако достоверно снижался уровень IL-17.

Установлено повышение провоспалительного цитокина IL-1β в слюне пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией, получавших стандартное лечение (табл. 2) в первые и 7 сутки исследования с последующим достоверным снижением в период реконвалесценции. IL-17 остается высоким на всем протяжении этапа мониторинга. Уровень противовоспалительного цитокина IL-10 повышался в первые сутки исследования с последующим снижением до нормальных величин с 7 по 28 сутки (p < 0,05). Оценка уровня IL-4 у пациентов 2 группы показала, что исходно его значение не отличалось от контрольной группы, с дальнейшим его увеличением в период стихания клинических симптомов и сохранением высокого значения до 28 суток. Следовательно, в период разгара заболевания при выраженных клинических проявлениях у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с вирусной инфекцией, не получавших иммунотропное лечение, существенно увеличен уровень IL-1β, IL-17, IL-10, IL-4. Причем у пациентов этой группы значение IL-10 и IL-4 ниже, а содержание IL-17 – выше, чем у пациентов, получавших реаферон-ЕС-липинт в период стихания клинических симптомов.

Таблица 2

Показатели уровня провоспалительных цитокинов у пациентов с хроническим тонзиллитом, ассоциированным с ВЭБ-инфекцией, получавших стандартное лечение, и у людей контрольной группы

№ п/п

Показатели, пг/мл

Исследуемые группы

Пациенты 2 группы

(n = 27)

Здоровые

(n = 20)

1-й день

7-й день

28-й день

 

1

ИЛ-1β

29,07 ± 6,5*

18,86 ± 4,2*

10,19 ± 2,8

5,04 ± 2,37

2

ИЛ-17

50,23 ± 2,6*

48,76 ± 4,0*

41,02 ± 3,5*

11,1 ± 1,82

3

ИЛ-10

9,97 ± 1,04*

6,45 ± 0,59#

6,32 ± 0,99

5,31 ± 0,43

4

ИЛ-4

5,6 ± 2,58

7,05 ± 1,25*#

6,44 ± 0,63*

3,33 ± 0,07

Примечание: статистическая достоверность: с группой контроля – * – p˂0,05; между группами сравнения – # – p˂0,05.

При сравнении локального цитокинового статуса двух исследуемых групп были выявлены следующие различия: уровень IL-10 сохранялся высоким с 1 по 7 дни исследования у пациентов, получавших реаферон-ЕС-липинт. Уровень IL-4 значительно повышался в разгар заболевания у данных пациентов. Показатели IL-17 достоверно снижались в период реконвалесценции.

Заключение

Выявлены особенности локального иммунитета при хроническом тонзиллите, ассоциированном с ВЭБ-инфекцией, получавших реаферон-ЕС-липинт. ВЭБ-инфекция характеризуется высоким уровнем ИЛ-10 в период стихания клинических симптомов, увеличением ИЛ-4 на 7 сутки исследования и значительным снижением ИЛ-17 в период реконвалесценции. Регистрировались признаки активности Th2-клеток (повышение уровня ИЛ-4) с периода угасания клинических симптомов.

Сочетанное применение стандартной схемы лечения и реаферон-ЕС-липинта способствовало более существенной положительной динамике показателей цитокинового статуса. В период угасания клинических симптомов у них зафиксирована более высокая продукция противовоспалительных цитокинов (ИЛ-10, ИЛ-4).

Применение иммуномодулятора при хроническом тонзиллите, ассоциированном с ВЭБ-инфекцией, обеспечило снижение ИЛ-17 в период реконвалесценции.

Результаты исследования применения препарата реаферон-ЕС-липинт в амбулаторной практике подтвердили целесообразность его использования и эффективность препарата в комплексном лечении хронического тонзиллита, ассоциированного с ВЭБ-инфекцией, что подтверждается полученными клинико-лабораторными данными, в том числе данными цитокинового исследования.

Как показало данное исследование, препарат реаферон-ЕС-липинт хорошо переносится пациентами. Побочные эффекты при применении препарата отсутствовали.

Рецензенты:

Просекова Е.В., д.м.н., профессор, зав. кафедрой биологической химии, клинической лабораторной диагностики, общей и клинической иммунологии, ГБОУ ВПО ВГМУ Минздравсоцразвития России, г. Владивосток;

Иванис В.А., д.м.н., профессор кафедры инфекционных болезней, ГБОУ ВПО «ВГМУ» Минздравсоцразвития России, г. Владивосток.

Работа поступила в редакцию 21.03.2013.