Актуальность проблемы. Промышленное освоение территорий Тюменской области привело к строительству новых городов и поселков, значительную часть населения которых составляют дети. Дети, родившиеся на Севере, – особая часть популяции. Они не обладают теми наследственными качествами, которые присущи коренным жителям, чьи приспособительные механизмы к экологическим условиям Крайнего Севера формировались на протяжении многих поколений.

Клинический анализ крови входит в перечень обязательных исследований при проведении профилактических осмотров детей. На основе его параметров и в сравнении с референсными интервалами (РИ) делается вывод о состоянии ребенка, принимается определенное клиническое решение.

Соответственно для повышения информативности и достоверности лабораторных тестов необходима разработка точных педиатрических РИ, которые смогут выполнять роль стандарта при сравнении с результатами исследования пациентов.

К сожалению, большинство РИ лабораторных анализов были установлены более трех десятилетий тому назад, при помощи аналитических технологий, которые во многом уже устарели и не могут считаться актуальными с точки зрения современных методов [6]. Пробелы в существующих педиатрических РИ могут привести к неверной трактовке полученных результатов и постановке ошибочного диагноза [2, 4, 9].

В настоящей работе с помощью автоматического гематологического анализатора мы исследовали количество лейкоцитов у здоровых детей в возрасте от 2 до 12 месяцев, определили РИ с помощью современных международных рекомендаций и разделили их в зависимости от возраста и пола.

Следует отметить, что РИ включают результаты обследования только 95 % популяции «практически здоровых детей», у 5 % пациентов лабораторные показатели будут выходить за границы «нормы». В свою очередь, значения, входящие в РИ, не могут гарантировать отсутствие заболевания [5].

Применение РИ, разработанных в конкретных лабораториях, позволяет применить более дифференцированный подход в оценке состояния детей, снизить тенденцию к гипердиагностике (например, необоснованный отвод при плановой вакцинации, применение дополнительных инвазивных методов исследования) и пр.

Таким образом, РИ можно рассматривать как необходимый ориентир в клинической практике врача – педиатра.

Материалы и методы исследования

Мы использовали метод локального установления РИ, применив классический способ со строго определенными критериями прямого отбора референсной группы.

Образцы капиллярной крови получили у 937 здоровых детей при проведении профилактических осмотров с диагнозом «Рутинное обследование состояния здоровья детей (Z 00.1)».

Капиллярную кровь использовали вследствие сложности проведения флеботомии у детей и связанных с этим проблем преаналитического этапа.

Соматическую патологию исключали по ретроспективному анализу амбулаторных карт и анкетированию родителей непосредственно перед процедурой.

Из дальнейшего анализа были исключены образцы крови детей:

● с гемолизом или наличием сгустков в пробах [1];

● повторные образцы, направленные на исследование в этот же период (по данным медицинской информационной системы «МИС-пациент»);

● с уровнем гемоглобина ниже 110 г\л согласно рекомендациям ВОЗ;

● c увеличением скорости оседания эритроцитов более 10 мм\час (по методу Панченкова).

Для оценки динамики количества лейкоцитов полученные данные были выделены по полу и возрасту обследованных детей: мальчики и девочки в группах от 2 до 6 месяцев и от 7 до 12 месяцев включительно.

Периферическую кровь собирали в пробирки с К3-ЭДТА («Microvette», Sarstedt, Германия). Образцы крови получали непосредственно в лаборатории и исследовали в течение 2 часов с момента взятия. Исследование проводили в марте – июле 2013 г., что позволило минимизировать погрешности, связанные с изменением настроек анализатора.

Анализ образцов крови соответствовал рутинной процедуре исследования общего анализа крови, в т.ч. режим работы гематологического анализатора, сервисное обслуживание прибора, проведение калибровки и процедуры внутрилабораторного контроля качества с использованием сертифицированных контрольных материалов при удовлетворительных результататах в Федеральной системе внешней оценки качества клинических лабораторных исследований [1].

Количество лейкоцитов исследовали с помощью автоматического гематологического анализатора
ADVIA 2120 (Siemens Healthcare Diagnostics Inc, США).

Все статистические процедуры выполняли с помощью программы StatSoft STATISTICA 10.

Для определения РИ использовали «Правила установления референтных интервалов и пределов» ГОСТ Р 53022.3-2008 [1] и современные протоколы Института клинических и лабораторных стандартов (CLSI) [8].

Исходя из предпосылки, что характер распределения в ряду количества лейкоцитов в группах здоровых детей отличался от нормального распределения, были применены непараметрические методы.

Из дальнейшего анализа были исключены статистические выбросы по методу Тьюки на основе интервала «нормальных» значений [5].

Полученные результаты были представлены как среднее значение (Хср), 95 % доверительный интервал для среднего (ДИ 95 %), стандартное отклонение (SD), стандартная ошибка среднего (StEr), и 2,5, 5, 50, 95, 97,5 процентили распределения.

РИ ограничили референтными пределами, между которыми располагается 95 % всех референтных значений. Ряд значений РИ расположен между 2,5 и 97,5 ‰ [3].

Для сравнения показателей в группах детей использовали U-критерий Манна-Уитни, различия считали статистически значимыми при p < 0,05.

Результаты исследования
и их обсуждение

Для расчета РИ мы использовали показатели количества лейкоцитов 884 детей, минимальный возраст обследованных cсоставил 2 месяца, максимальный – 12 месяцев.

Результаты исследования представлены в табл. 1.

Расчет РИ представлен в табл. 2 в виде 2,5–97,5 ‰.

Таблица 1

Количество лейкоцитов у детей первого года жизни

Таблица 2

Расчет количества лейкоцитов у детей первого года жизни

Таблица 3

Данные приведены для капиллярной крови. Необходимо учитывать, что при исследовании капиллярной крови количество лейкоцитов выше, чем в венозной примерно на 3–12 % [7, 10].

Для выявления возможной разницы показателей в группах девочек и мальчиков мы использовали U-критерий Манна-Уитни. Учитывая значения p, представленные в табл. 2, признавать различия достоверными оснований нет.

Для сравнения современные лаборатории указывают следующие данные табл. 3.

Заключение

В результате проведенных исследований была выполнена оценка динамики общего количества лейкоцитов в периферической крови детей разного пола и возраста с определением РИ.

Сравнивая полученные значения в группах девочек и мальчиков, было доказано отсутствие достоверной разницы в зависимости от пола.

Результаты проведенного исследования определили высокую значимость выполненной нами работы над уточнением достоверных педиатрических РИ и натолкнули нас на мысль о необходимости более детального и широкомасштабного подхода к изучению проблемы в современных условиях.

Материалы исследований можно использовать в клинической практике для повышения информативности лабораторных данных при исследовании анализа крови и рекомендовать для применения в других лабораториях [1] при работе на гематологических анализаторах ADVIA 2120 с помощью отбора и обследования ограниченной референсной группы (20 человек).

Литовченко О.Г., д.б.н., доцент, профессор кафедры физиологии медицинского института, проректор по научной и инновационной работе ГБОУ ВПО «Сургутского государственного университета ХМАО-Югры», г. Сургут;

Лапшина Е.Д., д.б.н., профессор, заведующая кафедрой биологии Югорского государственного университета, г. Ханты-Мансийск.

Работа поступила в редакцию 16.12.2014.