Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,118

АЛЬФА-ТОКОФЕРОЛ КАК КОРРЕКТОР ДАПСОН-ИНДУЦИРОВАННЫХ ИЗМЕНЕНИЙ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЛЕЙКОГРАММЫ

Лужнова С.А. 1 Самотруева М.А. 1, 2 Ясенявская А.Л. 1, 2 Абдрешева Р.Ж. 1
1 ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава Росси
2 ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России
В эксперименте на белых нелинейных крысах обоего пола трёх возрастных групп в осенний сезон исследовано влияние дапсона на показатели лейкоцитарной формулы периферической крови. Результаты свидетельствуют, что курсовое введение дапсона (21 день) вызывает у крыс всех возрастных групп статистически достоверное снижение относительного содержания нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов. У старых (21–24 мес.) крыс снижение содержания нейтрофилов составило 30–45 %, моноцитов– 50 % и не носит гендерных различий; эозинофилов у самцов – 70 %, у самок – до 45 %. У молодых самцов (7–9 мес.) репродуктивного возраста под действием дапсона снижение этих показателей достигает 40–50 %; у самок – до 70 % (моноциты). В группе животных предслучного возраста (2–3 мес.) наблюдали идентичные тенденции, но по абсолютным показателям ещё более выраженные. У крыс всех возрастов, получающих дапсон, в качестве компенсаторной реакции на потерю клеток выявлено значительное повышение относительного содержания палочкоядерных лейкоцитов. В качестве корректора нежелательных эффектов вводили α-токоферола ацетат в дозах 2; 5 и 10 мг/кг. Сочетанное введение α-токоферола и дапсона препятствовало развитию дапсон-индуцированных изменений: выявлено ярко выраженное статистически достоверное снижение в крови незрелых форм лейкоцитов. Независимо от пола у крыс всех возрастных групп, получающих дапсон в комбинации с α-токоферолом, не наблюдали значительных изменений в показателях формулы крови относительно контроля. Таким образом, воздействие дапсона на лейкоциты периферической крови носит системный характер и принципиально не зависит от пола. Установлено, что α-токоферол в дозах 2–10 мг/кг, стабилизируя мембраны клеток и, вероятно, вмешиваясь в процессы пролиферации, способен оказывать корригирующее действие.
дапсон
альфа-токоферол ацетат
нейтрофилы
моноциты
эозинофилы
коррекция
1. Астахова А.В., Лепахин В.К. Неблагоприятные побочные реакции и контроль безопасности лекарственных средств. – М.: КогитоЦентр, 2004. – 200 с.
2. Власова Н.В. Методы клинических лабораторных исследований: учебное пособие. – Красноярск: Красноярский медико-фармацевтический колледж, 2008. – 222 с.
3. Гланц С. Медико-биологическая статистика – М.: Практика, 1999. – 459 с.
4. Зборовский А.Б., Тюренков И.Н., Белоусов Ю.Б. Неблагоприятные побочные эффекты лекарственных средств. – М.: Медицинское информационное агентство, 2008. – 656 с.
5. Любин Н.А., Конова Л.Б. Методические рекомендации к определению и выведению гемограммы у животных. – Ульяновск: Изд-во Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии, 2005. – 113 с.
6. Об утверждении Правил лабораторной практики: приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 23 августа2010 г. № 708-н.
7. Профилактика неблагоприятных побочных реакций / под общ. ред. проф. Н.В. Юргеля, акад. РАМН В.Г. Кукеса. – M.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 450 с.
8. Ghu G.I., Stiller M.G. Dapsone and sulfones in dermatology overview and update // Journal of the American Academy of dermatology. – 2001. – Vol. 45. – № 3. – P. 420–434.
9. Directive 2004/9/EC of the European parliament and of the council of 11 February 2004 on the inspection and verification of good laboratory practice (GLP) // Official Journal of the European Union 20.2.2004. – P. 29–43.

В последние годы большое внимание фармакологами уделяется принятию мер по повышению безопасности фармакотерапии многих заболеваний. Принимаются эти меры как на этапе создания новых лекарственных средств, так и в процессе клинического использования препаратов в виде оптимизации их применения [1; 6].

Серьезной нежелательной лекарственной реакцией являются нарушения лейкопоэза, которые составляют около 40 % всех лекарственных поражений кроветворения. Возможность развития лейкоцитопении и агранулоцитоза отмечается у 10 % людей, принимающих ряд препаратов в течение продолжительного времени [1; 4; 6].

Одно из центральных мест в развитии медикаментозных нарушений лейкопоэза занимают противомикробные препараты. На протяжении шестидесятилетней истории для терапии лепры основным препаратом является производное сульфона – дапсон (4,4’-сульфонилбис[бензоламин]) [8]. Кроме того, он успешно применяется при лечении ряда других заболеваний, таких как герпетиформный дерматит Дюринга, туберкулез, профилактика малярии, лечение и профилактика пневмоцистной пневмонии, профилактика токсоплазмоза, лечение кожного лейшманиоза, мадурская стопа (мицетома), провоцируемая актиномицетами; ревматоидный артрит, субкорнеальный дерматоз, отдельные поражения кожного покрова (на фоне системной красной волчанки), кольцевидная гранулема, гангренозная пиодермия и др. Несмотря на высокую фармакологическую активность, препарат обладает рядом негативных эффектов, обусловленных формированием в ходе метаболизма гидроксиламин-производных. Наряду с нарушениями со стороны сердечно-сосудистой системы (аритмии, кардиалгия), кожных покровов (эксфолиативный дерматит, токсическая эритема, многоформная эритема, токсический эпидермальный некролиз, узелковая эритема, коре- и скарлатиноподобная реакции), органов ЖКТ (поражение печени, анорексия, тошнота, рвота). Дапсон нередко проявляет и гематотоксическое действие, вызывая поражения системы крови (дозозависимый гемолиз с понижением уровня гемоглобина и повышением числа ретикулоцитов, гемолитическая анемия, метгемоглобинемия, гипопластическая анемия) [8]. Высокий процент возникновения перечисленных выше нежелательных дапсон-индуцированных лекарственных реакций требует активного поиска исследователями оптимальных способов их коррекции.

Целью нашей работы явилось исследование возможных корригирующих свойств известного биорегулятора – альфа-токоферола – в отношении показателей лейкоцитарной формулы у лабораторных животных, получающих дапсон.

Материалы и методы исследования

Эксперименты проводили на белых нелинейных крысах обоего пола трёх возрастных групп: предслучного (2–3 мес.) (1-я серия), молодого репродуктивного возраста (7–9 мес.) (2-я серия) и старых (21–24 мес.) (3-я серия). Животные содержались в стандартных условиях вивария при естественном освещении и были синхронизированы по питанию при свободном доступе к воде. Исследование проводили в осенний сезон. Все манипуляции с животными осуществляли в соответствии с нормативной документацией «Об утверждении правил лабораторной практики» и Правил GLP [7; 9].

Особи каждой из трех серий были разделены на следующие группы: контроль 1 (дистиллированная вода), контроль 2 (дапсон), опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг), опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг) и опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг). Дапсон («Novartis», Швейцария) вводили животным через зонд в желудок в дозе 25 мг/кг (согласно рекомендациям ВОЗ, соответствует по эффективности 100 мг/кг в день для человека) 1 раз в день в утреннее время в течение 21 дня. Альфа-токоферол (ОАО «Щелковский витаминный завод») вводили животным per os в указанных выше дозах в сочетании с дапсоном при тех же условиях.

Забор крови проводили через сутки после последнего введения препаратов. Относительное содержание лимфоцитов, палочко- и сегментоядерных нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов подсчитывали при микроскопическом исследовании мазка, окрашенного по Романовскому‒Гимзе [2; 5].

Статистическую обработку результатов исследования проводили при помощи пакета прикладных программ Microsoft Office Excel 2007 и Statisticа 6.0 для Windows с применением непараметрического критерия U-Вилкоксона‒Манна‒Уитни [3].

Результаты исследования и их обсуждение

Результаты проведённого исследования показали, что курсовое введение дапсона вызывает у крыс всех возрастных групп статистически достоверное снижение относительного содержания нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов (табл. 1, 2).

Под влиянием дапсона у старых крыс-самцов снижение нейтрофилов составляло до 35 %, у самок – менее 30 %. Влияние дапсона на данный вид лейкоцитов мало зависело от пола. В этой же возрастной группе динамика процентной доли эозинофилов и моноцитов в лейкограмме отличалась у разнополых животных: снижение как эозинофилов, так и моноцитов у самцов составляло более 60 %, тогда как у самок – не более чем 30 % (эозинофилы) и 50 % (моноцитов) относительно крыс, не получающих дапсон.

У животных молодого репродуктивного возраста изменения в лейкограмме оказались сравнимы с таковыми у старых особей: у самцов практически совпадали, у самок показатели были ниже на 10 % (моноциты) и на 20 % (эозинофилы).

Относительный уровень нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов в периферической крови молодых самцов предслучного возраста (2–3 мес.) снижался в пределах 45–50 %. Самки репродуктивного возраста оказались более подвержены негативному влиянию дапсона: снижение относительного содержания моноцитов достигало 100 % (в мазках крови не определялись), эозинофилов – 65 %.

Во всех возрастных группах животных, получающих дапсон, в качестве компенсаторной реакции на потерю клеток выявлено значительное повышение относительного содержания палочкоядерных лейкоцитов. Содержание лимфоцитов практически не изменялось.

Таблица 1

Влияние α-токоферола на показатели лейкограммы крыс-самцов, получающих дапсон

Группы животных

n

Лимфоциты, M ± m, %

Нейтрофилы

Эозинофилы, M ± m, %

Моноциты, M ± m, %

палочкоядерные, M ± m, %

сегментоядерные, M ± m, %

Самцы старые, %

Контроль 1 (дист. вода)

8

67,3 ± 3,24

3,3 ± 0,4

28,2 ± 1,06

3,1 ± 0,03

1,14 ± 0,04

Контроль 2 (дапсон)

8

66,7 ± 3,7

13,1 ± 0,6*

18,3 ± 3,7*

1,17 ± 0,08*

0,43 ± 0,02*

Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг)

7

69,7 ± 4,7

3,86 ± 0,15◊

22,6 ± 1,0

2,84 ± 0,05◊

1,0 ± 0,01◊

Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг)

7

68,7 ± 4,7

3,4 ± 0,3◊

23,8 ± 1,1

2,86 ± 0,05◊

1,2 ± 0,02◊

Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг)

7

68,6 ± 5,3

2,7 ± 0,2◊

24,0 ± 2,5

2,6 ± 0,06◊

1,14 ± 0,07◊

Самцы молодого репродуктивного возраста, %

Контроль 1 (дист. вода)

7

70,4 ± 2,6

5,4 ± 2,3

20,3 ± 3,0

2,9 ± 0,6

1,0 ± 0,5

Контроль 2 (дапсон)

9

78,5 ± 3,1

7,0 ± 2,1

12,3 ± 2,0*

1,9 ± 0,8

0,3 ± 0,1*

Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг)

8

71,4 ± 4,3

4,6 ± 1,5◊

20,4 ± 4,9◊

2,5 ± 0,4

1,1 ± 0,7◊

Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг)

8

71,1 ± 4,3

5,0 ± 1,5

20,7 ± 4,9◊

2,1 ± 0,4

1,1 ± 0,7◊

Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг)

8

72,3 ± 9,7

5,3 ± 1,8

19,2 ± 2,3◊

2,3 ± 1,3

0,9 ± 0,3◊

Самцы предслучного возраста, %

Контроль 1 (дист. вода)

8

86,6 ± 3,0

1,6 ± 0,1

9,8 ± 0,2

1,4 ± 0,02

0,6 ± 0,02

Контроль 2 (дапсон)

9

92,2 ± 2,7

2,3 ± 0,1*

4,5 ± 0,2*

0,7 ± 0,02*

0,3 ± 0,03*

Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг)

8

89,3 ± 0,8

1,2 ± 0,2◊

8,6 ± 0,1◊

1,3 ± 0,08◊

0,6 ± 0,02◊

Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг)

8

86,2 ± 2,7

1,0 ± 0,2◊

10,7 ± 1,3◊

1,7 ± 0,1◊

0,5 ± 0,1◊

Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг)

8

87,1 ± 2,9

1,1 ± 0,1◊

10,1 ± 1,1◊

1,1 ± 0,2

0,6 ± 0,2

Примечание:* – p < 0,05 – относительно контроля 1; ◊ – p < 0,05– относительно контроля 2 (критерий U-Вилкоксона‒Манна‒Уитни).

Таблица 2

Влияние α-токоферола на показатели лейкограммы крыс-самок, получающих дапсон

Группы животных

n

Лимфоциты, M ± m, %

Нейтрофилы

Эозинофилы, M ± m, %

Моноциты, M ± m, %

палочкоядерные, M ± m, %

сегментоядерные, M ± m, %

Самки старые, %

Контроль 1 (дист. вода)

8

72,3 ± 4,8

1,4 ± 0,05

22,1 ± 1,2

3,0 ± 0,1

1,2 ± 0,08

Контроль 2 (дапсон)

8

75,8 ± 3,1

5,2 ± 1,1*

16,3 ± 2,1*

2,1 ± 0,1*

0,6 ± 0,02*

Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг)

7

70,0 ± 10,8

2,0 ± 0,2◊

24,9 ± 1,1◊

2,9 ± 1,2

1,1 ± 0,3◊

Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг)

7

70,0 ± 10,8

2,0 ± 0,2◊

25,7 ± 3,7◊

3,1 ± 1,2

0,9 ± 0,3

Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг)

7

64,4 ± 9,7

2,2 ± 0,5◊

26,4 ± 4,6◊

3,0 ± 1,1

1,0 ± 0,4

Самки молодого репродуктивного возраста, %

Контроль 1 (дист. вода)

7

79,5 ± 2,6

2,8 ± 1,0

16,1 ± 1,2

1,67 ± 0,1

1,0 ± 0,03

Контроль 2 (дапсон)

9

80,3 ± 3,2

6,3 ± 1,0*

11,2 ± 1,1*

0,8 ± 0,07*

0,4 ± 0,05*

Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг)

8

80,2 ± 2,5

2,7 ± 0,2◊

14,8 ± 0,9◊

1,4 ± 0,6◊

1,0 ± 0,2◊

Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг)

8

80,2 ± 2,5

2,7 ± 0,1◊

14,8 ± 1,2

1,3 ± 0,3◊

1,6 ± 0,2◊

Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг)

8

82,7 ± 2,9

3,1 ± 1,2◊

15,5 ± 1,6

2,0 ± 0,2◊

1,5 ± 0,7◊

Самки предслучного возраста, %

Контроль 1 (дист. вода)

8

87,7 ± 1,9

1,2 ± 0,1

9,0 ± 1,0

1,8 ± 0,05

0,3 ± 0,01

Контроль 2 (дапсон)

9

88,8 ± 1,5

5,4 ± 0,04*

5,3 ± 0,2

0,5 ± 0,02*

0*

Опыт 1 (дапсон + α-токоферол 2 мг/кг)

8

86,5 ± 2,7

1,2 ± 0,2◊

10,8 ± 1,1◊

1,2 ± 0,06◊

0,3 ± 0,02◊

Опыт 2 (дапсон + α-токоферол 5 мг/кг)

8

89,3 ± 1,4

0,9 ± 0,1◊

8,3 ± 1,2◊

1,2 ± 0,2◊

0,3 ± 0,02◊

Опыт 3 (дапсон + α-токоферол 10 мг/кг)

8

91,1 ± 2,0

1,3 ± 0,07◊

8,8 ± 1,7◊

1,5 ± 0,1◊

0,3 ± 0,01◊

Примечание:* – p < 0,05 – относительно контроля 1; ◊ – p < 0,05– относительно контроля 2 (критерий U-Вилкоксона‒Манна‒Уитни).

Сочетанное введение α-токоферола с дапсоном препятствовало развитию дапсон-индуцированных негативных процессов. У особей всех возрастных групп наблюдали выраженное статистически достоверное снижение в крови незрелых форм лейкоцитов относительно крыс, получающих дапсон. Независимо от пола при комбинированной терапии не наблюдали значительных изменений в показателях формулы крови относительно контрольных крыс.

Выводы

Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что влияние дапсона на лейкоциты периферической крови принципиально не зависит от пола и возраста животных и отличается только интенсивность воздействия. Биорегулятор α-токоферол в дозах 2–10 мг/кг, стабилизируя мембраны клеток и, вероятно, вмешиваясь в процессы пролиферации, способен оказывать корригирующее воздействие, приводя показатели к величинам сопоставимым с контрольными. Осуществление коррекции небольшими дозами α–токоферола позволяет длительное его использование без возможных негативных эффектов. Диапазон доз от 2 до 10 мг/кг предполагает возможность применения индивидуального подхода в зависимости от пола, возраста, а также исходного антиоксидантного статуса организма.

На основании полученных данных может быть разработан способ коррекции дапсон-индуцированной лейкопении для клинического использования в дерматологии, в том числе в лепрологии, при лечении ряда инфекционных болезней (малярии, пневмоцистной пневмонии и др.).

Рецензенты:

Дегтярёв О.В., д.м.н., профессор кафедры дерматовенерологии, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, г. Астрахань;

Нестеров Ю.В., д.б.н., профессор кафедры физиологии и морфологии человека и животных, ФГБОУ ВПО «Астраханский государственный университет», г. Астрахань.

Работа поступила в редакцию 19.07.2013.


Библиографическая ссылка

Лужнова С.А., Самотруева М.А., Самотруева М.А., Ясенявская А.Л., Ясенявская А.Л., Абдрешева Р.Ж. АЛЬФА-ТОКОФЕРОЛ КАК КОРРЕКТОР ДАПСОН-ИНДУЦИРОВАННЫХ ИЗМЕНЕНИЙ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЛЕЙКОГРАММЫ // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 7-3. – С. 580-583;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=32059 (дата обращения: 16.10.2018).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252