Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,074

ВЛИЯНИЕ ОКСИМЕТИЛУРАЦИЛА НА ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ ТЕТРАХЛОРМЕТАНОМ

Муфазалова Л.Ф. 1 Муфазалова Н.А. 1
1 ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет», Уфа
Изучена эффективность применения оксиметилурацила для коррекции повреждающего воздействия тетрахлорметана на функциональное состояние нейтрофилов. Тетрахлорметан вводили внутрижелудочно (1,25 мл/кг 50% раствора в оливковом масле) на протяжении 4 суток, оксиметилурацил (50 мг/кг) в течение 7 дней после окончания введения токсиканта. Определяли количество лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови, интенсивность кислородзависимого метаболизма (НСТ-тест), поглотительную и антимикробную активность, содержание миелопероксидазы и катионных белков в нейтрофилах. Результаты регистрировали на 7, 14 и 28 сутки от окончания введения токсиканта. В условиях интоксикации тетрахлорметаном оксиметилурацил устраняет депрессию токсикантом оксидантных и неоксидантных факторов микробицидности, повышает интенсивность кислородзависимого метаболизма и восстанавливает поглотительную способность нейтрофилов. Оксиметилурацил в условиях интоксикации тетрахлорметаном оказывает значимое корригирующее воздействие на функциональное состояние нейтрофилов.
тетрахлорметан
нейтрофилы
микробицидность
оксиметилурацил
1. Гареев Е.М. Основы математико-статистической обработки медико-биологической информации. – Уфа: Изд-во ГОУ ВПО «Башгосмедуниверситет Роздрава», 2009. – 346 с.
2. Долгушин И.И., Андреева Ю.С., Савочкина А.Ю. Нейтрофильные ловушки и методы оценки функционального статуса нейтрофилов. – М.: Изд-во РАМН, 2009. – 208 с.
3. Влияние тетрахлорметана на показатели иммунной системы / П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, В.Ф. Киричук, Н.И. Карпенко // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. – 2004. – Т. 137, № 1. – С. 56–58.
4. Забродский П.Ф. Изменение цитокинового профиля и редукция функции субпопуляций лимфоцитов при подостром отравлении тетрахлорметаном / П.Ф. Забродский, В.Ф. Киричук, В.Г. Лим // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. – 2009. – Т. 147, № 1. – С. 55–57.
5. Лазарева Д.Н., Алехин Е.К., Плечев В.В. Иммурег. – Уфа, 2004. – 103 с.
6. Лазарева Д.Н. Оксиметилурацил (иммурег) – стимулятор иммунитета / Д.Н. Лазарева, Е.К. Алехин, В.В. Плечев // Медицинский вестник Башкортостана. –2007. – №6. – С. 70–75.
7. Лемза С.В. Фармакотерапевтическая эффективность комплексного растительного средства «гепатон» при экспериментальном повреждении печени / С.В. Лемза, Т.А. Ажунова, А.Г. Мондодоев // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. –2010. – №2 (72). – С. 181–184.
8. Мананова С.Ш. Оппозитное влияние 5-оксиметилурацила на митогенный ответ Т-лимфоцитов при стимуляции через Т-клеточный рецептор или через Т-клеточный рецептор и Ко-рецепторную молекулу CD28 / С.Ш. Мананова, И.А. Пашнина, С.В. Сибиряк // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2010. – Т. 150, № 7. – С. 66–69.
9. Мирсаев Т.Р. Гепатопротекторная активность оксиметилурацила: автореф. дис. ... канд. мед. наук. – Уфа, 2002. – 22 с.
10. Мышкин В.А., Бакиров А.Б. Оксиметилурацил (очерки экспериментальной фармакологии). – Уфа: ДАР, 2001. – 218 с.
11. Мышкин В.А., Ибатуллина Р.Б., Бакиров А.Б. Поражения печени химическими веществами. (Функционально-метаболические нарушения, фармакологическая коррекция). – Уфа: Изд-во Гилем, 2007. – 177 с.
12. Плескова С.Н. Модуляция кислородзависимого и кислороднезависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов квантовыми точками / С.Н. Плескова, Э.Р. Михеева // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. – 2011. – Т. 151, № 4. – С. 452–454.
13. Саратиков А.С. Влияние гепатопротекторов, содержащих фосфолипиды, на зависимую от цитохрома Р-450 антитоксическую функцию печени при экспериментальном токсическом гепатите / А.С. Саратиков, А.И. Венгеров-
ский // Бюлл. эксперим. биологии и медицины.– 1999.– Т. 127, № 4. – С. 392–394.
14. Степовая Е.А., Роль тиолдисульфидной системы в механизмах изменений функциональных свойств нейтрофилов при окислительном стрессе / Е.А. Степовая, Г.В. Петина, Т.В. Жаворонок // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. – 2010. – Т. 150, № 8. – С. 161–165.
15. Ягода А.В. Клиническая цитохимия / под ред. А.В. Ягоды, Н.А. Локтева. – Ставрополь, 2005.– 485 с.

Тетрахлорметан (ТХМ) широко применяется в промышленности как растворитель масел, жиров, каучука, чистки и обез­жиривания одежды [11]. Хорошо известно гепатотоксическое действие ТХМ [7, 8, 11], однако установлено, что высокая смертность при острых интоксикациях ТХМ тесно связана и с его иммунотоксическим действием [3, 4]. Попадая в организм, ТХМ оказывает плейотропное повреждающее действие, основным механизмом которого является активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) [11]. Это особенно важно для нейтрофилов, поскольку продукция активных форм кислорода является молекулярной основой реализации ими эффекторной функции [2]. Следовательно, оксидативный стресс, вызывая нарушение редокс-статуса нейтрофилов, может существенно нарушить антимикробный потенциал этих клеток [12, 14].

Цель исследования. Изучение эффективности применения оксиметилурацила (ОМУ) - иммуномодулятора с антиоксидантным и гепатопротекторным действием [5, 6, 8, 9, 10], для коррекции повреждающего воздействия ТХМ на функциональное состояние нейтрофилов.

Материалы и методы исследования

Протоколы экспериментов и содержание животных были составлены в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медикобиологических исследований с использованием животных» (1985) и приказа МЗ РФ №267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики». Эксперименты выполнены на 145 белых неинбредных крысах массой 200-220 г. Животные были разделены на 3 группы (по 15 животных в группе): контроль, ТХМ, ТХМ + ОМУ. ТХМ вводили внутрижелудочно в дозе 1,25 мл/кг 50% раствора в оливковом масле на протяжении 4 суток (в -4, -3, -2 и -1 дни) [13]. ОМУ применяли в виде суспензии на 2% крахмальной слизи в дозе 50 мг/кг в течение 7 дней [9], считая день окончания введения токсиканта нулевым днем.

Определяли количество лейкоцитов, нейтрофилов и лимфоцитов в периферической крови, интенсивность кислородзависимого метаболизма (спонтанный и индуцированный НСТ-тест), поглотительную способность, антимикробную активность полиморфноядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) в условиях функционирования и блокады (азидом натрия) кислородзависимых факторов микробицидности в отношении грибов Candida albicans, активность миелопероксидазы (МП) и содержание катионных белков (КБ) в нейтрофилах [2, 15]. Активность МП и КБ оценивали по интенсивности окраски, пользуясь 5-балльной шкалой по методу L.S. Kaplow, вычисляли процент активных клеток в мазке (ПА) и средний цитохимический коэффициент (СЦК):

СЦК = (1а + 2в + 3с + 4d)/100,

где 1-4 - интенсивность окраски, а, в, с, d - количество ПМЯЛ с соответствующей интенсивностью окраски [15].

Результаты регистрировали на 7-е, 14-е и 28-е сутки от окончания введения токсиканта. Статистическую обработку полученных данных проводили с использованием методов вариационной статистики [1], пакета программ Statistica 6.0. Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Вилка. При нормальности распределения признака оценку значимости различий проводили с использованием t-критерия Стьюдента, достоверными считали различия при уровне значимости р < 0,05. Данные представлены в% к контролю.

Результаты исследования и их обсуждение

В результате проведенных исследований установлено, что воздействие токсиканта приводило к формированию лейкопении все сроки наблюдения, обусловленной на 7 сутки лимфопенией (62,1%, p < 0,001), на 14 сутки - равномерным снижением, как нейтрофилов, так и лимфоцитов (до 59,1% (p < 0,02) и 65,9% (p < 0,001) соответственно), а на 28 сутки наблюдалось преимущественное снижение числа нейтрофилов (60,9%, p < 0,001). При этом наблюдалось падение микробицидной способности ПМЯЛ. Двукратное снижение кислородзависимого киллинга ПМЯЛ отмечено на 7 и 14 сутки наблюдения (индекс инактивации (ИИ) составил 59,1% (p < 0,001) и 61,3% (p < 0,001) соответственно), что цитохимически подтверждалось уменьшением активности МП: число МП-позитивных клеток составило 67,9% (p < 0,001) и 72,2% (p < 0,001), а СЦК - 67,8% (p < 0,001) и 72,8% (p < 0,001) (на 7 и 14 сутки соответственно). При этом было отмечено снижение интенсивности кислородзависимого метаболизма ПМЯЛ в условиях индукции (индуцированный НСТ-тест). Полученные данные свидетельствуют об угнетении токсикантом как пероксидазозависимых, так и пероксидазонезависимых оксидантных микробицидных систем ПМЯЛ на 7-е и 14-е сутки наблюдения. Следует отметить глубокое угнетение токсикантом неоксидантных механизмов киллинга: на 7 сутки ИИ снизился более чем в 4 раза (ИИ - 24,8%, p < 0,001), что цитохимически подтверждалось снижением уровня КБ в ПМЯЛ (СЦК - 38,8%, p < 0,001). На 14 сутки активность неоксидантных микробицидных систем повышалась в 2 раза (по сравнению с 7 сутками), но не восстанавливалась (ИИ - 60,5%, p < 0,01), что коррелировало с двухкратным (по сравнению с 7 сутками) повышением уровня КБ в нейтрофильных гранулоцитах (СЦК - 73,2%, p < 0,001).

К 28 суткам наблюдения как кислородзависимая, так и кислороднезависимая микробицидность ПМЯЛ повышалась, не достигая, однако, уровня интактных животных (ИИ составил 84,5% (p < 0,02) и 84,4% (p < 0,01) соответственно). Это сопровождалось снижением активности МП (СЦК - 74,3%, p < 0,01), интенсивности оксидантного метаболизма (индуцированный НСТ-тест) и количества КБ (СЦК - 72,6%, p < 0,001) в ПМЯЛ.

На все сроки наблюдения было отмечено снижение поглотительной способности нейтрофилов (фагоцитарный индекс (ФИ) составил 76,4% (p < 0,001), 78,5% (p < 0,05) и 86,6% (p < 0,05) соответственно).

На 7-е сутки наблюдения применение ОМУ ослабляло выраженность лейкопении за счет увеличения числа лимфоцитов (до 78,9%, p < 0,05). Однако ОМУ не устранял падения микробицидной способности ПМЯЛ в условиях как функционирования, так и блокады оксидантных механизмов киллинга (ИИ составил 50,1 и 34,2% соответственно), что сопровождалось снижением активности МП (СЦК - 71,7%) и уровня КБ (СЦК - 54,0%) в ПМЯЛ, что согласуется с данными других авторов о постепенном наступлении эффекта препарата [6].

На 14-е сутки использование ОМУ устраняло индуцированную токсикантом лейкопению за счет равномерного увеличения как нейтрофилов, так и лимфоцитов (до 93,7% (p < 0,01) и 90,5% (p < 0,001) соответственно). Наблюдалось полное восстановление активности кислородзависимых фунгицидных систем ПМЯЛ (ИИ составил 104,5%, p < 0,001). Это сопровождалось повышением до нормы активности МП (процент МП-позитивных клеток составил 92,5% (p < 0,001), СЦК - 91,0% (p < 0,001)) и активацией оксидантного метаболизма ПМЯЛ (индуцированный НСТ-тест), что свидетельствует о восстановлении под влиянием ОМУ как пероксидазозависимых, так и пероксидазонезависимых оксидантных механизмов киллинга нейтрофилов. Также ОМУ устранял депрессию токсикантом неоксидантных фунгицидных систем ПМЯЛ (ИИ составил 94,4%, p < 0,001), что цитохимически подтверждалось повышением до нормы уровня КБ в нейтрофилах: процент КБ-позитивных клеток составил 111,4% (p < 0,001), СЦК - 110,3% (p < 0,001). Ценно, что применение ОМУ обеспечило снижение до нормы числа ПМЯЛ, участвующих в фагоцитозе (87,7%, p < 0,001) с повышением их поглотительной способности (ФИ - 138,1%, p < 0,01).

На 28 сутки сохранялась индуцированная ТХМ лейкопения. Вместе с тем ОМУ устранял, как и на 14 сутки, депрессию токсикантом кислородзависимых фунгицидных систем ПМЯЛ (ИИ - 91,7%, p < 0,05), что сопровождалось повышением активности МП (процент МП-положительных клеток составил 120,4% (p < 0,001), а СЦК - 118,1% (p < 0,001)) и восстановлением интенсивности оксидантного метаболизма этих клеток. Наблюдалась активация неоксидантных механизмов микробицидности ПМЯЛ (ИИ - 123,4%, p < 0,001), что сочеталось с повышением уровня КБ (СЦК - 94,8%, p < 0,001) в нейтрофилах. Также ОМУ восстанавливал поглотительную способность ПМЯЛ (ФИ - 92,5%), что согласуется с данными других авторов [5].

Выводы

Таким образом, оксиметилурацил в условиях интоксикации ТХМ оказывает значимое корригирующее воздействие на функциональное состояние нейтрофильных гранулоцитов: устраняет депрессию токсикантом оксидантных и неоксидантных факторов микробицидности, повышает интенсивность кислородзависимого метаболизма и восстанавливает поглотительную способность нейтрофилов.

Рецензенты:

Валеева Л.А., д.м.н., профессор, декан фармацевтического факультета, зав. кафедрой фармакологии №2 ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России, г. Уфа;

Медведев Ю.А., д.м.н., профессор, научный консультант лаборатории препаратов крови НПО «Микроген» отделение «Иммунопрепарат», г. Уфа.

Работа поступила в редакцию 22.02.2012.


Библиографическая ссылка

Муфазалова Л.Ф., Муфазалова Н.А. ВЛИЯНИЕ ОКСИМЕТИЛУРАЦИЛА НА ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ НЕЙТРОФИЛОВ ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ ТЕТРАХЛОРМЕТАНОМ // Фундаментальные исследования. – 2012. – № 4-2. – С. 340-343;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=29818 (дата обращения: 14.12.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074