Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,222

ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВОЗДЕЙСТВИЯ ЛОНГИДАЗЫ, ГИПОКСЕНА И ЭССЕНЦИАЛЕ НА НАРУШЕННЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ С ОСТРЫМ БИЛИАРНЫМ И НЕБИЛИАРНЫМ ПАНКРЕАТИТОМ

Долгарева С.А. 1 Локтионов А.Л. 1 Конопля А.И. 1 Суняйкина О.А. 1 Гаврилюк В.П. 1
1 ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет», Курск
Под постоянным наблюдением находилось 82 пациента с острым панкреатитом (40 пациентов с билиарным и 42 больных с небилиарным острым панкреатитом), проходивших стационарное лечение в МУЗ «Городская клиническая больница №4» г. Курска с 2008 по 2011 г. В работе представлены данные о нарушениях структурно-функциональных свойств мембраны эритроцитов у больных острым панкреатитом билиарной и небилиарной этиологии до и после традиционной терапии. Определена недостаточная эффективность использования традиционной комплексной терапии у больных острым панкреатитом и обоснована необходимость применения дополнительно лонгидазы, гипоксена и эссенциале в работе профильных лечебных и профилактических учреждений.
острый панкреатит
традиционная фармакотерапия
лонгидаза
гипоксен
эссенциале
1. Гаврилюк В.П. Иммуннометаболические нарушения у детей с разлитым аппендикулярным перитонитом с различной степенью тяжести / В.П. Гаврилюк, А.И. Конопля, С.В. Костин // Человек и его здоровье. – Курск, 2010. – № 4. – С. 38–42.
2. Григорьева Т.И. Роль липидмодифицирующегося компонента биомембран в противопанкреатическом эффекте препаратов метаболического типа действия // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. – 2008. – №4. – С. 103–107.
3. Дифференциальная диагностика и принципы терапии различных форм панкреатита и панкреонекроза / Ю.В. Лузганов, Н.Е. Островская, К.С. Шкиря, В.А. Ягубова // Русский медицинский журнал. – 2005. – Т. 13, № 27. – С. 1842–1846.
4. Конопля А.И. Взаимосвязь структуры и функции эритроцитов с иммунным гомеостазом. – Курск: КГМУ, 2008. – 40 с.
5. Крылов В.И. Метод тонкослойной хроматографии липидов мембран эритроцитов / В.И. Крылов, А.Ф. Виноградов, С.И. Ефремова // Лаб. дело. – 1984. – № 4. – С. 205–206.
6. Лакин Г.Ф. Биометрия. – М.: Высшая школа, 1980. – 243 с.
7. Семко Г.А. Структурно-функциональные изменения мембран и внешних примембранных слоев эритроцитов при гиперэпидермопоэзе // Украинский биохимический журнал. – 1998. – Т. 70, № 3. – С. 113–118.
8. Тогайбаев А.А. Способ диагностики эндогенной интоксикации / А.А. Тогайбаев, А.В. Кургузкин, И.В. Рикун // Лабораторное дело. – 1988. – № 9. – С. 22–24.
9. Шишкина Л.Н. Липиды эритроцитов крови и их функциональная активность / Л.Н. Шишкина, О.Г. Шевченко // Успехи современной биологии. – 2010. – Т. 130, №6. – С. 587–602.
10. Эритроцитзависимые эффекты лекарственных и физиотерапевтических средств / Л.Г. Прокопенко, А.И. Лазарев, А.И. Конопля и др. – Курск: КГМУ, 2008. – 328 с.
11. Beutler E. How do red cell enzymes age a new perspective // Brit. J. Haemat. – 1985. – Vol. 61. – P. 377–384.
12. Dodge G.T. The preparation and chemical characteristics of hemoglobin free ghosts of human eryrhrocytes / G.T. Dodge, C. Mitchell, D.J. Hanahan // Arch. Biochem. Biophys. – 1963. – Vol. 100. – P. 119–130.
13. Fairbanks G. Electrophoretic analysis of the major polypeptides of the human erythrocyte membrane / G. Fairbanks, T. Steck // Biochemistry. – 1971. – Vol. 10. – P. 2606–2616.
14. Laemli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacterophage T4 // Nature. – 1970. – Vol. 227. – P. 680.

Острый панкреатит является важнейшей проблемой экстренной хирургии. Занимает третье место среди заболеваний, которые составляют острую хирургическую патологию органов брюшной полости и наблюдается от 9 до 12,5 %, при этом летальность остается высокой (3,6-32,5 %) и составляет 87,6 % при развитии осложнений, а именно при панкреонекрозе, особенно в ранние сроки заболевания. Современное течение острого панкреатита характеризуется тенденцией к генерализации, способствуя вовлечению в патологический процесс иммунной, эндокринной систем и появлению как локальной, так и общесоматической симптоматики [2, 3].

Сегодня можно с убедительностью утверждать, что эритроциты вовлекаются в патологический процесс не только при гематологических заболеваниях, но и претерпевают серьезные изменения структуры и функции при болезнях разного генеза, в том числе и при остром панкреатите. Мембрана эритроцита играет ключевую роль в детерминации гомеостаза и функциональной способности клетки. От физико-химического состояния эритроцитарной мембраны зависят процесс активного транспорта ионов, особенности функционирования мембранассоциированных ферментов, характер взаимодействия клетки со средой, что, в свою очередь, непосредственно влияет на патогенез заболевания [2, 4].

Цель исследования - определение эффективности использования лонгидазы, гипоксена и эссенциале Н в коррекции структурно-функциональных свойств мембран эритроцитов у больных острым панкреатитом различной этиологии.

Материал и методы исследования

Под постоянным наблюдением на основании информированного согласия находилось 82 пациента с острым билиарным панкреатитом (40 пациентов с билиарным и 42 больных с небилиарным острым панкреатитом), проходивших стационарное лечение в МУЗ «Городская клиническая больница №4» г. Курска с 2008 по 2011 г. В качестве контроля исследовали периферическую кровь 14 здоровых доноров добровольцев.

Постановку диагноза осуществляли на основании жалоб, анамнеза заболевания, объективного и лабораторного обследования, инструментальных данных: УЗИ, ФГДС и рентгенографии. Из исследования исключались пациенты, у которых происходило нагноение очагов панкреатической деструкции. Среди методов декомпрессии желчных путей при билиарном остром панкреатите предпочтение отдавали транспапиллярным вмешательствам, выполняемым в кратчайшие сроки от момента госпитализации.

Все обследованные получали традиционное лечение (инфузионная терапия со спазмолитиками и анальгетиками; антиферментные препараты - гордокс, контрикал; антибактериальная терапия, препаратами широкого спектра действия, антисекреторная терапия). При этом 20 больных ОБП и 19 пациентов с ОНБП дополнительно получали лонгидазу (по 3000 МЕ внутримышечно через 72 часа №5), гипоксен (по 2,0 в 5 % - 400,0 раствора глюкозы внутривенно капельно через 24 часа №7) и эссенциале Н (по 5,0 внутривенно медленно через 24 часа №10).

Лабораторные методы исследования крови проводились по общепринятым методикам при поступлении больных в стационар и на 15-е сутки. При оценке гемограмм за основу брались физиологические нормы, соответствующие международной системе единиц (СИ) в клинических исследованиях.

Эритроциты получали из 5 мл гепаринизированной крови по методу E. Beutler [11]. Определяли сорбционную способность эритроцитов (ССЭ) [8] и сорбционную емкость их гликокаликса (СЕГ) [7]. О функциональном состоянии эритроцитов судили также по накоплению малонового диальдегида (МДА) [10].

Мембраны эритроцитов получали методом G.T. Dodge [12]. Электрофорез проводили в присутствии додецилсульфата натрия в вертикальных пластинах полиакриламидного геля по методу U.K. Laemmli [14]. Белки окрашивали кумаси голубым R-250 по модифицированной методике G. Fairbanks [13]. Липиды выделяли методом тонкослойной хроматографии [5].

Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя непараметрические методы [6].

Результаты исследования и их обсуждение

При поступлении в стационар у больных ОБП выявлено снижение представительности в мембране красных клеток крови подфракций спектрина (α и β), анкирина, анионтранспортного белка (АТБ), белка полосы 4.5 и повышение - белка полосы 4.1, паллидина, дематина, актина, тропомиозина, СЕГ, ССЭ и концентрации внутри клеток МДА (табл. 1).

Таблица 1

Структурно-функциональные свойства мембраны эритроцитов у больных ОП
на фоне традиционного лечения (M ± m)

Показатели

Единицы

измерения

1

2

3

4

5

Больные ОП

Здоровые

ОБП

ОНБП

ОБП

после ТЛ

ОНБП

после ТЛ

α-спектрин

мг %

114,3 ± 8,01

98,4 ± 5,1*1

83,1 ± 3,6*1,2

122,8 ± 5,3*2

99,6 ± 7,8*1,3

β-спектрин

мг %

106,6 ± 7,62

81,9 ± 4,8*1

68,8 ± 3,6*1,2

92,3 ± 6,9*1,2

70,6 ± 12,7*1

Анкирин

мг %

113,3 ± 8,92

92,7 ± 3,8*1

30,6 ± 5,5*1,2

113,3 ± 3,7*2

39,9 ± 5,1*1

Анионтранспортный белок

мг %

189,6 ± 9,4

166,9 ± 8,8*1

138,7 ± 3,9*1,2

178,2 ± 2,8*1,2

159,7 ± 9,5*1,3

4.1

мг %

43,3 ± 4,12

56,6 ± 2,7*1

75,5 ± 4,1*1,2

46,8 ± 8,7*2

68,1 ± 8,9*1

Паллидин

мг %

56,6 ± 3,91

70,6 ± 4,2*1

92,8 ± 5,8*1,2

71,9 ± 5,8*1

68,4 ± 7,1*1,3

4.5

мг %

98,2 ± 7,45

73,6 ± 5,7*1

71,9 ± 2,5*1

92,9 ± 7,2*2

64,6 ± 9,2*1

Дематин

мг %

20,1 ± 2,12

45,6 ± 2,1*1

64,9 ± 3,1*1,2

35,8 ± 3,7*1,2

72,9 ± 7,3*1

Актин

мг %

102,1 ± 8,94

124,5 ± 7,8*1

168,2 ± 6,1*1,2

129,1 ± 10,4*1

159,0 ± 17,1*1

Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа

мг %

37,8 ± 2,61

36,1 ± 2,8

22,6 ± 1,1*1,2

34,9 ± 7,3

27,8 ± 3,2*1

Тропомиозин

мг %

68,8 ± 4,63

88,9 ± 4,1*1

92,7 ± 5,1*1

78,1 ± 5,9*1,2

73,8 ± 12,5*2

Глутатион-S-трансфераза

мг %

49,3 ± 4,12

50,5 ± 2,9

41,5 ± 1,8*1,2

59,1 ± 6,3

42,6 ± 3,0*1

СЕГ

10-12 г/эр.

1,42 ± 0,11

1,57 ± 0,11*1

1,25 ± 0,05*1,2

1,38 ± 0,15*2

1,44 ± 0,13*3

ССЭ

%

32,8 ± 1,23

48,4 ± 3,89*1

20,5 ± 1,01*1,2

39,9 ± 2,7*1,2

19,7 ± 1,9*1

МДА

нмоль ⋅106 эр.

3,54 ± 0,15

5,2 ± 0,28*1

6,5 ± 0,38*1,2

3,35 ± 0,44*2

5,67 ± 0,48*1

У пациентов с ОНБП в отличие от предыдущей группы в большей степени снижена представительность α- и β-спектрина, анкирина, АТБ, достоверно выше уровень белка полосы 4.1, паллидина, дематина, актина и концентрация внутриклеточного МДА (см. табл. 1). При этом у пациентов с ОНБ по сравнению с пациентами с ОНБП и со здоровыми донорами снижен уровень глутатион-S-трансферазы (Г-S-Т), глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы, ССЭ и СЕГ (см. табл. 1).

У пациентов с ОБП при госпитализации выявлено повышение в эритроцитарной мембране уровеня свободного холестерина, свободных жирных кислот, триглицеридов, фосфатидилэтаноламина, лизофосфатидилхолина, фосфатидилинозитола и снижена концентрация сфингомиелина и фосфатидилхолина, тогда как у пациентов с ОНБП снижен уровень моно- и диглицеридов, эфиров холестерина, в то время как уровень фосфатидилэтаноламина, лизофосфатидилхолина, фосфатидилинозитола в отличие от предыдущей группы остается на уровне нормы, так же как концентрация свободного холестерина, при этом уровень сфингомиелинов достоверно ниже (табл. 2).

Таблица 2

Липидный спектр мембран эритроцитов у больных ОП
на фоне традиционного лечения (M ± m)

Показатели

Единицы
измерения

1

2

3

4

5

Больные ОП

Здоровые

ОБП

ОНБП

ОБП

после ТЛ

ОНБП

после ТЛ

Холестерин

мг %

47,8 ± 1,4

58,2 ± 1,1*1

50,9 ± 0,33*1,2

49,8 ± 0,35*1,2

48,7 ± 0,15*3

Эфиры холестерина

мг %

46,2 ± 1,62

47,0 ± 0,4

35,4 ± 0,63*1,2

47,6 ± 0,31

34,7 ± 0,38*1

Свободные жирные кислоты

мг %

2,98 ± 0,17

3,46 ± 0,17*1

3,44 ± 0,19*1

2,28 ± 0,19*1,2

2,86 ± 0,2*3

Моно и диглицериды

мг %

9,6 ± 0,49

9,04 ± 0,2

7,64 ± 0,42*1,2

10,3 ± 0,51*2

8,83 ± 0,4*3

Триглицериды

мг %

14,5 ± 0,67

16,9 ± 0,23*1

15,1 ± 0,43*2

16,7 ± 0,32*1

15,5 ± 0,49

Фосфатидилхолин

мг %

23,0 ± 0,7

12,4 ± 0,1*1

11,5 ± 0,23*1,2

16,7 ± 0,52*1,2

11,4 ± 0,36*1

Фосфатидилэтаноламин

мг %

23,5 ± 0,67

26,0 ± 0,17*1

24,6 ± 0,13*1,2

24,0 ± 0,6*2

23,8 ± 0,2*3

Лизофосфатидилхолин

мг %

5,4 ± 0,17

8,6 ± 0,48*1

5,57 ± 0,12*2

9,28 ± 0,46*1

4,73 ± 0,18*1,3

Фосфатидилинозитол

мг %

19,7 ± 0,69

22,0 ± 0,38*1

19,8 ± 0,1*2

24,2 ± 0,37*1,2

22,0 ± 0,2*1,3

Сфингомиелин

мг %

11,0 ± 0,52

9,6 ± 0,22*1

8,97 ± 0,1*1,2

10,6 ± 0,11*2

9,1 ± 0,46*1

Проведенное традиционное лечение у данной категории пациентов с ОП выявило следующие изменения в содержании белков и липидов мембран эритроцитов. У пациентов с ОБП использование комплексного лечения позволило нормализовать в мембране эритроцитов уровень анкирина, белка полосы 4.1, 4.5, СЕГ и концентрацию внутри клеток МДА, тогда как у пациентов с ОНБП нормализует достоверно меньшее количество показателей белкового спектра - уровень тропомиозина и СЕГ (см. табл. 1).

Использование комплексного лечения у пациентов с ОБП нормализует в мембране красных клеток крови количество фосфатидилэтаноламина и сфингомиелина и корригирует уровень холестерина, свободных жирных кислот и изученных фосфолипидов (см. табл. 2).

У больных с ОНБП после проведенного лечения в мембране красных клеток крови нормализовался уровень свободных жирных кислот, моно- и диглицеридов (см. табл. 1, 2).

Исходя из этого, в условиях ОБП и ОНБП показано использование препаратов, корригирующих метаболические процессы в эритроцитах и клетках поврежденных тканей и, таким образом, препятствующих накоплению в крови «агрессивных» соединений - антиоксидантов и мембранопротекторов, при этом нельзя забывать о необходимости использования при данной патологии препаратов, обладающих иммуномодулирующим действием.

В связи с этим нами в качестве схемы коррекции были выбраны следующие препараты - лонгидаза, гипоксен и эссенциале (рисунок).

Использование данной комбинации дополнительно к традиционной фармакотерапии позволило у больных ОБП нормализовать представительность в мембране эритроцитов анионтранспортного белка, дематина, актина и тропомиозина, что тем самым нормализовало общую сорбционную их способность, кроме этого у данной категории больных при использовании схемы «лонгидаза + гипоксен + эссенциале Н» нормализуется уровень холестерина, свободных жирных кислот и фосфатидилхолина (см. рисунок).

У пациентов с ОНБП применение лонгидазы, гипоксена и эссенциале Н позволило нормализовать в мембране красных клеток крови количество подфракций спектрина, моно- и диглицеридов, фосфатидилинозитола, корригировать уровень белка полосы 4.5, дематина, малонового диальдегида, эфиров холестерина, свободных жирных кислот, что также нормализовало ССЭ (см. рисунок).

pic pic

Влияние традиционного лечения и комлекса препаратов «лонгидаза + гипоксен + эссенциале Н»
на структурно-функциональные свойства эритроцитарной мембраны у больных ОБП и ОНБП:
Примечания:
1 - радиус окружности - значение показателей у больных ОБП и ОНБ после ТЛ (1 группа);
2 - p- значения показателей у больных ОБП после
ТЛ + «лонгидаза + гипоксен + эссенциале Н» (2 группа); 3 - p- значения показателей у больных ОНБП после ТЛ + «лонгидаза + гипоксен + эссенциале Н» (3 группа);
4 - p- p < 0,05 по отношению к 1 группе; 5 - p- p > 0,05 по отношению к группе здоровых доноров; Х - холестерин, ЭХ - эфиры холестерина, СЖК - свободные жирные кислоты,
МДГ - моно- и диглицериды, ТГ - триглицериды, ФХ - фосфатидилхолин,
ФЭ - фосфатидилэтаноламин, ЛФХ - лизофосфатидилхолин,
ФИ - фосфатидилинозитол, СМ - сфингомиелин

Заключение

Исходя из функций интегральных и периферических белков мембраны эритроцитов, можно заключить, что выявленные изменения у больных ОБП направлены на уменьшение прочности и деформируемости эритроцитарной мембраны, повышение общей сорбционной способности эритроцитов и их гликолаликса и снижение их метаболической активности, что ускоряет процессы старения красных клеток крови, тогда как у пациентов с ОНБП данные изменения более выражены, но при этом снижены сорбционные свойства мембраны эритроцитов [9, 10].

Кроме этого, у больных ОБН и ОНБП в мембране эритроцитов выявлены различные изменения в липидном спектре, что, в свою очередь, сказывается и на организации мембраны в целом. Так, повышенный уровень холестерина уменьшает подвижность жирных кислот, снижает латеральную диффузию липидов и белков, изменяет функцию последних. Снижение сфингимиелина обусловливает снижение микровязкости липидной фазы мембраны, тогда как низкий уровень фосфатидилхолина снижает проницаемость мембраны и уменьшает метаболизм холестерина [1, 4, 9].

Острый панкреатит сопровождается повышенным «уклонением» ферментов из поджелудочной железы в кровь и снижением активности основного ингибитора сериновых протеиназ α1-антитрипсина. Вследствие этого сыворотка крови становится токсичной для форменных элементов крови, в том числе эритроцитов. Другой возможной причиной повреждения эритроцитов может быть интенсификация свободнорадикальных процессов, связанная с генерацией нейтрофильными лейкоцитами в очагах воспаления активных форм кислорода и со снижением активности антиоксидантной защиты эритроцитов, результатом чего является возрастание их чувствительности к перекисным процессам [2]. Все это вызывает перестройку мембран красных клеток крови за счет изменения представительности белков и липидов, что, в свою очередь, влияет на сорбционные и иммунотропные свойства эритроцитов в условиях системной воспалительной реакции, играющей первостепенную роль в патогенезе острого панкреатита.

Использование иммуномодулятора - лонгидазы, антиоксиданта - гипоксена и мембранопротектора - эссенциале Н у больных ОП оказывает выраженной корригирующей влияние на белковый и липидный спектр в эритроцитарной мембране, по сравнению с традиционной комплексной фармакотерапией, что необходимо использовать в работе профильных лечебно-профилактических учреждений.

Рецензенты:

Снимщикова И.А., д.м.н., профессор, зав. кафедрой иммунологии и специализированных клинических дисциплин ГОУ ВПО «Орловский государственный университет», г. Орел;

Афанасьев Ю.И., д.м.н., профессор, зав. кафедрой внутренних болезней №1. ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», г. Белгород.

Работа поступила в редакцию 30.09.2011.


Библиографическая ссылка

Долгарева С.А., Локтионов А.Л., Конопля А.И., Суняйкина О.А., Гаврилюк В.П. ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВОЗДЕЙСТВИЯ ЛОНГИДАЗЫ, ГИПОКСЕНА И ЭССЕНЦИАЛЕ НА НАРУШЕННЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ С ОСТРЫМ БИЛИАРНЫМ И НЕБИЛИАРНЫМ ПАНКРЕАТИТОМ // Фундаментальные исследования. – 2011. – № 11-2. – С. 287-291;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=29048 (дата обращения: 20.07.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252