Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,222

EFFECTIVENESS OF «REKITSENA-RD» IN TREATMENT ANIMALS EXPERIMENTAL ACUTE POST-STREPTOCOCCAL GLOMERULONEPHRITIS

Коломеец Н.Ю., Аверьянова Н.И., Косарева П.В.
Целью работы явилось определение эффективности применения биологически активной добавки «Рекицен-РД с фруктоолигосахаридами» при лечении экспериментального острого гломерулонефрита. Эксперимент выполнен на 40 животных – самцах и самках беспородных белых крыс. Острый гломерулонефрит у животных моделировали по запатентованной методике. Полученные результаты позволяют сделать заключение об эффективном использовании в лечении экспериментального острого гломерулонефрита комплекса «Рекицен-РД с фруктоолигосахаридами» и рекомендовать его применение при лечении острого гломерулонефрита в клинической практике.
The study was undertaken to determine the effectiveness of biologically active additive «Rekitsen-RD wit FOS (fructooligosaccharides)» in the treatment of experimental acute glomerulonephritis. The experiment was carried out on 40 animals – male and female outbred albino rats. Animals acute glomerulonephritis was molded on the patented technique. The obtained results allow to conclude that the effective complex «Rekitsen-RD with FOS» use in the treatment of experimental acute glomerulonephritis and recommend it in the treatment of acute glomerulonephritis in clinical practice. Keywords: experimental acute glomerulonephritis, white rats, biologically active additive «Rekitsen-RD with FOS (fructooligosaccharides)»

Эффективность использования пероральных энтеросорбентов в комплексном лечении ряда заболеваний, в том числе заболеваний почек экспериментально и клинически обосновано [1, 3]. Метод энтеросорбции сегодня успешно применяют как в стационарных, так и амбулаторных условиях [2, 4, 5, 6]. Основные механизмы действия энтеросорбентов: поглощение токсических веществ и их метаболитов, попадающих в желудочно-кишечный тракт извне и образующихся там; поглощение токсинов, диффундирующих в просвет кишечника из крови; сорбционная модификация диеты за счет избирательного поглощения аминокислот и свободных желчных кислот; фиксация и перенос физиологически активных веществ (ферментов, желчных кислот и т.д.); каталитическое действие. Помимо этого, энтеросорбенты, оставаясь в пределах желудочно-кишечного тракта и не имея собственной фармакодинамики, оказывают мощное системное (дистантное) воздействие на организм - способствуют компенсации всех звеньев иммунной системы. Анализируя публикации о применении энтеросорбционных препаратов в лечении заболеваний почек, мы не нашли данных об использовании в лечении пациентов с гломерулярной патологией ферментированных нерастворимых и растворимых пищевых волокон в качестве селективного сорбента [8, 9].

Целью нашего исследования явилось определение эффективности применения отечественного препарата (БАД) «Рекицен-РД с фруктоолигосахаридами» в качестве энтеросорбента в комплексном лечении экспериментального острого гломерулонефрита.

Материал и методы исследования

Эксперимент выполнен на 40 животных - самцах и самках беспородных белых крыс, массой 150,6 ± 18,24 г, четырехмесячного возраста, содержащихся в стандартных условиях вивария: содержание в пластиковых клетках с мелкой древесной стружкой, не более 10 особей в клетке, стандартный рацион и питьевой режим в соответствии с нормами, утвержденными приказом Министра здравоохранения СССР от 10 марта 1966 г. № 163 и приказом Минздрава СССР от 10.10.83 № 1179 (пункт 4.1). Все эксперименты проведены согласно «Правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу Министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г. № 755) и «Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» от 18 марта 1986 г. Животные были разделены на 4 экспериментальные группы: I группа-контрольная (интактные животные), типовой рацион вивария, n = 8; II группа-моделирование острого гломерулонефрита, типовой рацион вивария, забор аутопсийного материала осуществляли у 8 животных на 21 день, у 8 животных - на 31 день эксперимента, n = 16; III группа - моделирование острого гломерулонефрита, типовой рацион вивария, экспериментальная терапия Амоксиклавом (амоксициллин, клавулановая кислота, LEK d.d., Словения), забор аутопсийного материала осуществляли на 31 день эксперимента, n = 8; IV группа - моделирование острого гломерулонефрита, экспериментальная терапия Амоксиклавом, типовой рацион вивария с добавлением (БАД) «Рекицен-РД с фруктоолигосахаридами», забор аутопсийного материала осуществляли на 31 день эксперимента, n = 8.

БАД «Рекицен-РД с фруктоолигосахаридами» (ТУ 9295-006-05344371-2006; номер госрегистрации: 77.99.23.3. У2066.3.06 от 10.03.2006. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Не является лекарством), выпускает ЗАО «Ягодное», г. Киров, д. Югрино, Россия. БАД представляет собой таблетированный комплекс, основным компонентом которого являются ферментированные нерастворимые и растворимые пищевые волокна пшеничных отрубей, метаболизированные винными дрожжами Saccharomices vini, и короткоцепочечные жирные кислоты, являющиеся патогенетической основой профилактического и лечебного действия пищевых волокон, а также «жёсткие» структурные компоненты пищевых волокон, обладающие сорбционной способностью. «Рекицен-РД с фруктоолигосахаридами» используется в качестве дополнительного источника пищевых волокон практически здоровыми людьми при воздействии неблагоприятных экологических и производственных факторов, повышенном риске формирования дисбактериоза, онкологических заболеваний, сахарного диабета, при лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта, нарушений обмена веществ, вторичной иммунной недостаточности, алкогольной интоксикации, аллергической патологии кожи.

Острый нефрит у животных моделировали по запатентованной методике, используя многократную иммунизацию нефритогенным штаммом пиогенного стрептококка - Dick-I Streptococcus pyogenes (ГНИИ стандартизации и контроля им. Л.А. Тарасевича). Штамм пиогенного стрептококка вводили 1 раз в день внутрибрюшинно по схеме: 3 цикла, каждый из которых состоял из 1, 3, 5 дней иммунизации и 2 дней перерыва между циклами.

Экспериментальную терапию начинали на 22 день эксперимента. Амоксиклав животным вводили интраперитонеально из расчета 100 мг/кг в сутки в течение 10 дней. Комплекс «Рекицен-РД с фруктоолигосахаридами» добавляли в ежедневный рацион в количестве 10 % суточного объема пищи (3 г в сутки), предварительно механически измельчая его и смешивая с кормом.

Животным проводили эвтаназию под эфирным наркозом в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите экспериментальных животных 86/609 ЕЕС, осуществляли забор внутренних органов (почек) для дальнейшего гистологического и морфометрического исследований. Почки животных фиксировали в 10 %-м нейтральном формалине, подвергали обезвоживанию в спиртах возрастающей крепости, заливали в парафин. Срезы получали на ротационном микротоме (толщина 3-4 мкм), окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по ван Гизону, нитратом серебра по Футу. Микроскопию препаратов в проходящем свете проводили с использованием светового микроскопа Micros (Австрия) при увеличении микроскопа ×60, ×150, ×600, ×1500; захват гистологических объектов осуществляли при помощи цифровой камеры для микроскопа CAM V200 Micros «Handelsgesellschaft m.b.H.» (Австрия).

Результаты исследования и их обсуждение

При проведении аутопсии почки животных контрольной группы имели бобовидную форму, капсула легко снималась, обнажая блестящую, гладкую поверхность светло-коричневого цвета. На разрезе корковое вещество имело светло-коричневый цвет, мозговое вещество - темно-красный. Лоханка не расширена, ее слизистая оболочка блестящая, гладкая. При проведении гистологического исследования у животных контрольной группы не было выявлено гистологических признаков развития острого нефрита, гистологическое строение ткани почек соответствовало нормальному: четко выявлялись капсула почки, корковое вещество с почечными тельцами и извитыми канальцами, мозговое вещество, визуализировались сосочки и почечная лоханка, выстланная переходным эпителием. Сосудистые клубочки нефрона не изменены. Проксимальные и дистальные почечные канальцы с типичной структурой.

С целью подтверждения воспроизводимости модели острого гломерулонефрита забор материала у 8 животных II группы осуществляли на 21 день эксперимента. При проведении аутопсии почки иммунизированных животных имели бобовидную форму, были увеличены в размерах, выглядели набухшими. На разрезе корковое вещество серовато-коричневого цвета, мозговое вещество - вишнево-красное; лоханка не изменена. При проведении микроскопии гистологических препаратов в ткани почек выявлялось полнокровие сосудов коркового и мозгового вещества, в корковом веществе визуализировалось большое количество увеличенных гиперцеллюлярных клубочков с резко уменьшенным мочевым пространством, инфильтрированных нейтрофильными гранулоцитами, эозинофилами и лимфоцитами, с аккумуляцией большого числа моноцитов в просветах капилляров. Выявленные изменения характеризовали в этом сроке экссудативную фазу воспаления и отмечались не менее, чем в 60 % клубочков, выявляемых в гистологическом срезе. Отмечалось сужение просветов капилляров клубочков вследствие пролиферации эндотелиальных и мезангиальных клеток, появление клубочков с лобулярной структурой. В проксимальных и дистальных канальцах нефронов выявлялись участки белковой дистрофии эпителия, в интерстициальной ткани почек - участки воспалительной инфильтрации лимфоцитами, нейтрофилами и макрофагами.

При проведении аутопсии у 8 иммунизированных животных II группы на 31 день эксперимента макроскопически отмечались признаки отёка почечной ткани, изменения в лоханках отсутствовали. Гистологическое исследование ткани почек животных этой группы выявило в большинстве клубочков (80 %) преобладание процессов пролиферации, что выражалось в появлении, наряду с мезангиальной и эндотелиальной пролиферацией, отложений нитей фибрина и белковых масс в капсуле Шумлянского-Боумена, сращении капилляров клубочка с капсулой и образовании полулуний в отдельных клубочках. Отмечался также тромбоз капилляров почечных телец. Гломерулярная базальная мембрана визуально выглядела значительно утолщенной. В проксимальных и дистальных извитых канальцах находили белковую дистрофию эпителия, в межуточной ткани почек - воспалительную инфильтрацию нейтрофильными гранулоцитами и лимфоцитами.

У животных III группы (экспериментальная терапия Амоксиклавом) при заборе аутопсийного материала также отмечалось увеличение почек в размерах. Визуализировались пирамиды тёмно-красного цвета, корковое вещество - серовато-коричневое. Гистологически в ткани почек животных этой экспериментальной группы выявлялись расширенные и полнокровные капилляры клубочков, при окрашивании гистологических срезов солями серебра - утолщенная гломерулярная базальная мембрана. Кроме того, отмечалась выраженная лимфоцитарная инфильтрация интерстициального пространства клубочка и перигломерулярная инфильтрация, пролиферация мезангиальных клеток. В части клубочков выявлялось значительное утолщение париетального листка капсулы Шумлянского-Боумена, спайки капиллярных петель с париетальным листком капсулы и спайки между капиллярными петлями. Выявленные изменения отмечались в 50 % клубочков.

При заборе аутопсийного материала у животных IV группы, иммунизированных культурой нефритогенного штамма Str. рyogenes, получавших экспериментальную терапию Амоксиклавом, типовой рацион и питьевой режим вивария с включением в рацион питания комплекса ферментированных пищевых волокон и КЦЖК, почки животных были незначительно увеличены в размерах, почечная капсула, лоханка на разрезе визуально не изменены. При проведении гистологического исследования большинство клубочков имели нормальную структуру и морфометрические характеристики. В отдельных клубочках (не более 20 % в срезе) отмечалась пролиферация мезангиальных клеток, наличие спаек между капиллярными петлями, а также между капиллярными петлями и париетальным листком капсулы клубочка, полнокровие капилляров.

Заключение

Полученные в процессе проведения экспериментальных исследований результаты позволяют сделать заключение об эффективном использовании в лечении экспериментального острого гломерулонефрита комплекса «Рекицен-РД с фруктоолигосахаридами» и рекомендовать его применение при лечении острого гломерулонефрита в клинической практике.

Список литературы

  1. Багдасарова И.В., Осадчая О.И., Боярская А.М. Клиническая эффективность энтеросорбции при микробно-воспалительных и иммунокомплексных заболеваниях почек у детей // Здоровье ребенка: журнал для педиатров. - 2008. - №2. - С. 28-32.
  2. Долженко М.Н. Острый коронарный синдром: лечение диабетической дислипидемии методом энтеросорбции // Медицина неотложных состояний. - 2007. - №3 (10). - С. 66-70.
  3. Косарева П.В. Экспериментальное обоснование новых способов патогенетической коррекции пиелонефрита у детей: автореф. дис. ... д-ра мед. наук. - Челябинск, 2010. - 54 с.
  4. Yagi M. Effects of chitosan-coated dialdehyde cellulose, a newly developed oral adsorbent, on glomerulonephritis induced by anti-Thy-1 antibody in rats / Yagi M., Като S., Nishitoba T. et al. // J. Nephron. - 1998. - Vol. 78, № 4. - P. 433-439.
  5. Sanaka T. Clinical analysis of renoprotective responding patients administrated with oral adsorbent in chronic renal failure secondary to chronic glomerulonephritis / Sanaka T., Akizawa T., Koide K., Koshikawa S. // Therapeutic apheresis and dialysis. - 2003. - Vol. 7, № 2. - P. 269-278.
  6. Tsukasa Nakamura. Oral Adsorbent AST-120 Decreases Carotid Intima-Media Thickness and Arterial Stiffness in Patients with Chronic Renal Failure/Takaharu Matsuda, Yasuhiro Kagoe et al. // Kidney&Blood Pressure Research. - 2004. - Vol. 27, № 2. - P. 121-126.
  7. Seiji Ueda. Oral Adsorbent AST-120 Decreases Serum Levels of AGEs in Patients with Chronic Renal Failure / Seiji Ueda, Sho-ichi Yamagishi, Masayoshi Takeuchi et al. // J. Mol Med. - 2006. - Vol. 12, № 7-8. - P. 180-184.
  8. Miyazaki T., Aoyama I., Ise M. An oral sorbent reduces overload of indoxyl sulphate and gene expression of TGF-ß1 in uraemic rat kidneys // Nephrol. Dial. Transplant. - 2000. - Vol. 15. - P. 1773-1781.
  9. Aoyama I., Miyazaki T., Niwa T. Preventive effects of an oral sorbent on nephropathy in rats // Miner Electrolyte Metab. - 1999. - Vol. 25(№ 4-6). - Р. 365-372.

Рецензенты:

Сыропятов Б.Я., д.м.н., профессор, зав. кафедрой патологии ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия», г. Пермь;

Молдавская А.А., д.м.н., профессор кафедры анатомии человека Астраханской государственной медицинской академии, г. Астрахань.