Scientific journal
Fundamental research
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,222

Шитов Л.Н.

Одной из наиболее остро стоящих проблем, возникающих при назначении пациентам иммунодепрессантов и цитостатиков, является высокий риск развития инфекционных осложнений, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, в том числе представителями нормальной микрофлоры организма человека, в число которых входят энтерококки. Вместе с тем, некоторые непатогенные штаммы энтерококков обладают широким спектром антагонистической активности, и их численность в составе микрофлоры толстой кишки в значительной степени влияет на колонизационную резистентность.

Цель настоящего исследования - оценка влияния циклофосфамида, преднизолона и метотрексата на численность и видовой состав энтерококков в составе кишечной микрофлоры белых мышей.

Материалы и методы.

В работе использованы препараты Веро-метотрексат, 1%-ный раствор натриевой соли метотрексата для инъекций (ЗАО «Верофарм», Москва), Циклофосфан, порошок для приготовления раствора для инъекций (ОАО «Биохимик», Саранск), Преднизолон Никомед, раствор для внутривенного и внутримышечного введения (Nycomed, Австрия), питательные среды производства ГНЦ прикладной микробиологии и биотехнологии (г. Оболенск).

Исследования выполнены на 40 белых беспородных мышах-самках массой 30±3 г. Контрольные и опытные группы состояли из 10 животных. Препараты вводили внутрибрюшинно. Схемы введения выбирали исходя из режимов дозирования, применяемых у человека. В соответствии с рекомендациями «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2000) дозы, применяемые у человека, увеличивали в 11,8 раза. Циклофосфамид вводили в дозе 35,4 мг/кг ежедневно; метотрексат - 2,5 мг/кг в неделю за 2 приёма с интервалом 24 часа; преднизолон - 2,5 мг/кг ежедневно. Продолжительность введения всех препаратов составляла 6 недель. Животным контрольной группы вводили стерильную дистиллированную воду. Выделение энтерококков осуществляли на энтерококкагаре (г. Оболенск), идентификацию Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium осуществляли визуально по морфологии колоний через 24-48 часов инкубации при 37˚С. Статистическую обработку полученных данных проводили на IBM PC совместимом компьютере с помощью программ STATISTICA (StatSoft, Inc.) релиз 7.0и Primer of Biostatistics (Stanton A. Glantz, McGraw Hill) версия 4.03 в среде WINDOWS.

Результаты.

Распределение значений оцениваемых показателей отличалось от нормального, поэтому для оценки различий между группами использовали непараметрический дисперсионный анализ по критерию Крускала-Уоллиса и множественные сравнения по критерию Данна.

Через 2 недели наблюдались статистически достоверные (P<0,05) различия между показателями общего числа энтерококков у контрольной группы и группы, получавшей метотрексат; имело место повышение общего числа энтерококков в 6,7 раза (см. таблицу 1). У животных, получавших циклофосфамид и преднизолон, содержание энтерококков также было повышено, однако различия оказались статистически недостоверными.

Наблюдались тенденции к повышению числа E. faecium у мышей всех опытных групп и к снижению числа E. faecalis у мышей, получавших преднизолон и метотрексат, однако различия были статистически недостоверны.

Таблица 1. Общее число энтерококков в фекалиях мышей, получавших иммунодепрессанты (данные через 2 недели после начала введения)

Группа

Медиана

Минимум

Максимум

25-й

процентиль

75-й

процентиль

Квартильный

Размах

число энтерококков в млн КОЕ/г

Контроль

2,66

1,00

10,24

2,34

6,03

3,69

Циклофосфан

7,82

2,50

17,06

4,38

11,93

7,56

Преднизолон

9,22

4,68

36,34

6,41

30,15

23,74

Метотрексат

17,75

5,48

54,81

6,62

40,13

33,52

Через 4 недели наблюдались статистически достоверные (P<0,05) различия между показателями общего числа энтерококков у контрольной группы и групп, получавших преднизолон (превышение в 5,1 раза) и метотрексат (превышение в 1,7 раза, таблица 2).

Таблица 2. Общее число энтерококков в фекалиях мышей, получавших иммунодепрессанты (данные через 4 недели после начала введения)

Группа

Медиана

Минимум

Максимум

25-й

процентиль

75-й

процентиль

Квартильный

Размах

число энтерококков в млн КОЕ/г

Контроль

3,65

2,73

4,40

3,13

4,20

1,08

Циклофосфан

6,48

2,88

14,51

4,49

8,82

4,34

Преднизолон

18,73

4,41

25,57

9,95

20,72

10,77

Метотрексат

6,18

5,17

10,00

5,62

8,25

2,63

Имело место статистически достоверное повышение числа E. faecalis у мышей, получавших преднизолон, по сравнению со всеми остальными группами, а также повышение количества E. faecium у группы, получавшей преднизолон, по сравнению с контрольной группой (таблицы 3 и 4).

Таблица 3. Число E. faecalis в фекалиях мышей, получавших иммунодепрессанты (данные через 4 недели после начала введения)

Группа

Медиана

Минимум

Максимум

25-й

процентиль

75-й

процентиль

Квартильный

Размах

число E. faecalis в млн КОЕ/г

Контроль

2,57

1,32

3,73

1,81

3,29

1,48

Циклофосфан

1,22

0,11

4,30

0,57

3,52

2,95

Преднизолон

9,94

8,35

10,53

8,45

10,01

1,56

Метотрексат

2,09

0,29

2,69

0,52

2,56

2,04

Таблица 4. Число E. faecium в фекалиях мышей, получавших иммунодепрессанты (данные через 4 недели после начала введения)

Группа

Медиана

Минимум

Максимум

25-й

процентиль

75-й

процентиль

Квартильный

Размах

число E. faecium в млн КОЕ/г

Контроль

0,83

0,45

3,08

0,55

2,35

1,80

Циклофосфан

5,09

0,19

11,43

2,40

8,92

6,52

Преднизолон

7,93

4,41

25,57

4,97

18,12

13,15

Метотрексат

3,82

3,14

9,71

3,20

7,07

3,87

Через 6 недель после начала введения препаратов отсутствовали достоверные различия как по общему числу энтерококков, так и по их видовому составу.

Таким образом, из рассматриваемых препаратов наиболее значимые изменения в численности и видовом составе энтерококков вызывают преднизолон и метотрексат; указанные изменения наблюдаются через 2-4 недели после начала введения препаратов и нивелируются через 6 недель.

Работа представлена на V научную международную конференцию «Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины», Тайланд (Паттайа), 20-28 февраля 2008 г. Поступила в редакцию 27.12.2007.