С целью визуализации лимфатического русла использовался метод внутритканевой (интерстициальной) инъекции лимфатических сосудов видоизмененной синей массой Герота (Gerota D., 1896), 0,5% раствором метиленовой сини и 50% раствором черной и синей туши.
Массу Герота готовили по прописи, предложенной Т.Б.Бициевым (1981). Для этого брали 4-8 г эскизной масляной краски "лазурь железная" и растирали ее в ступке с 2-4 г очищенного скипидара в течение 25-30 минут. Полученную массу разводили в 100 мл хлороформа и фильтровали через несколько слоев хлопчатобумажной ткани.
Наиболее качественные препараты получались после предварительной выдержки материала перед наливкой в проточной холодной воде в течение 48-72 часов. После этого при наливке происходило наиболее полное заполнение лимфатических сосудов, посткапилляров и капиллярных сетей красителем.
Непосредственно перед наливкой лимфатического русла, препарат подогревался в теплой (38-40° С) воде в течение 30-60 мин. На протяжении всей инъекции препарат находился в кювете с постоянным доступом теплой воды для предотвращения остывания и пересыхания.
Для инъецирования лимфатического русла трубчатых органов овец, цветную массу вводили как со стороны серозной оболочки органов, так и со стороны слизистой оболочки. При этом, вкол иглы производился непосредственно в подоболочечное пространство, на глубину 0,1-0,5 см под острым углом к поверхности органа. Инъекционная масса вводилась при минимальном давлении на поршень шприца, при появлении экстравазатов манипуляция прекращалась. Для наиболее качественного заполнения лимфатического русла красителем, в момент инъекции производился осторожный массаж органа влажным марлевым тампоном.
При помощи данного метода определялось формирование лимфатических сосудов, их направление, характер слияния, количество сосудов, впадающих в лимфоузлы и выходящих из них, измерялся калибр сосудов, велся подсчет их клапанов, измерялись длина, ширина и толщина регионарных лимфатических узлов, изучались взаимоотношения лимфатических сосудов и узлов с магистральными кровеносными сосудами, а так же их отношение к различным анатомическим областям.
Для выявления архитектоники мелких лимфатических сосудов и капиллярного лимфатического русла, а так же выяснения взаимоотношений между лимфатическими и кровеносными капиллярами и сосудами пользовались методом просветления стенки данных органов.
Просветляли препараты по методу Д.А. Жданова (1956). Для этого отбирались кусочки органов с наиболее налитыми красителем капиллярными сетями размером 4х4 см и фиксировались в 10% растворе формалина в течение 24 часов. Для обезвоживания препараты проводили через батарею этиловых спиртов в возрастающих концентрациях:. Затем препараты помещались в 3% раствор перекиси водорода на 30-60 мин для отбеливания, а после этого в 50-75% раствор глицерина на 5-6 дней. Далее, препараты расслаивали под бинокулярной лупой МБС-2 и помещали в чистый глицерин для полного просветления и хранения.
Кроме того, нами применялась упрощенная методика просветления препаратов по В.Ю.Чумакову (2003). Для этого, после фиксации в 10%-ном растворе формалина, промывки и обезвоживания в спиртах возрастающей концентрации, препараты помещались в чистый глицерин и они хранились там до полного просветления.
Так же нами использовалась ускоренная методика просветления препаратов по методу Т.С. Сетекова, С.А. Абдыкеримова и Р.К. Садырова (1988). Для этого налитые препараты фиксировались в 10% растворе формалина в течение 24 часов, а затем, обезвоживались в закрытом стеклянном бюксе в термостате при температуре 55°С в течение 8-11 часов. При этом происходило испарение воды в виде капель, что приводило к высушиванию препаратов и, в то же время, вода, скопившаяся на стенках бюкса, предохраняла препараты от чрезмерного высушивания, делая их более эластичными. После этого, высушенные препараты помешали в чистый глицерин и в термостат с температурой 55°С. Просветление препаратов наступало через 10-20 дней.
Библиографическая ссылка
Складнева Е.Ю., Медкова А.Е., Новицкий М.В., Кудашова Е.А., Романов В.М., Красовская Р.Э., Назарова Е.А. НЕКОТОРЫЕ ИНЪЕКЦИОННЫЕ И БЕСПРЕПАРОВОЧНЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ЛИМФАТИЧЕСКОГО РУСЛА У ОВЕЦ // Фундаментальные исследования. – 2004. – № 2. – С. 156-156;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=4092 (дата обращения: 17.08.2024).