Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,252

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ВЭЖХ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ЛИСТЬЕВ СКУМПИИ КОЖЕВЕННОЙ (Cotinus coggygria Scop.)

Гриценко А.И. 1 Сенченко С.П. 1 Попова О.И. 1
1 Пятигорский медико-фармацевтический институт филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России
В настоящей статье обсуждаются результаты исследования фенольных соединений листьев скумпии кожевенной (Cotinus coggygria Scop.) методом ВЭЖХ. Высушенные образцы сырья были заготовлены в 2013 году в фазу цветения растения на юго-восточном склоне горы Машук в городе Пятигорске Ставропольского края. Исследование проведено в двух условиях: без гидролиза сырья и после кислотного гидролиза. Определено содержание 5 фенольных соединений, среди которых доминирующими являются гиперозид, рутин и феруловая кислота, а также кверцетин и кемпферол в незначительных количествах. В извлечении, полученном после проведения кислотного гидролиза, установлено значительное повышение содержания кверцетина и кемпферола, что свидетельствует о значительном содержании в сырье их производных (гликозиды, сложные эфиры). Использование указанного подхода может быть использовано для оценки качества сырья скумпии кожевенной.
скумпия кожевенная
ВЭЖХ
фенольные соединения
1. ВФС 42-1059-80 (1980).
2. Гриценко А.И., Попова О.И. Содержание флавоноидов в листьях скумпии кожевенной // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сборник научных трудов. –Пятигорск, 2013. – № 68. – С. 41–43.
3. Попова О.И., Леонова В.Н., Савенко И.А.. Исследование фенольных соединений листьев форзиции промежуточной (Forsythia intermedia Zabel.) // Хим. раст. сырья. – 2012. – № 2. – С. 199–201.
4. Черепанов С.К. Сосудистые растения России и сопредельных государств (в пределах бывшего СССР) // Мир и семья. – СПб., 1995. – С. 19.
5. Чумакова В.В., Попова О.И. Изучение фенольных соединений травы лофанта анисового // Фармация. – 2011. – № 3. – С. 20–22.
6. Nićiforović N., Mihailović V., Mašković P. et al. Antioxidant activity of selected plant species; potential new sources of natural antioxidants // Food Chem Toxicol., 48(11), 3125-3130 (2010).

Скумпия кожевенная (Cotinus coggygria Scop.) представляет собой ветвистый кустарник или деревце семейства Сумаховые (Anacardiaceae). Произрастает от юга Западной Европы до Китая и Гималаев. На территории России встречается в нижнем течении Дона и повсеместно на территории Северного Кавказа, преимущественно на сухих каменистых склонах, в лесах и зарослях кустарников [4].

Листья скумпии кожевенной являлись сырьём для промышленного получения танина. Наряду с дубильными веществами в сырье скумпии содержится значительное количество флавоноидов, содержание которых в сумме превышает 1 %. Основными компонентами данной группы биологически активных веществ (БАВ) являются мирицетин, кверцетин и кемпферол [2]. На основе содержания в сырье суммы флавоноидных агликонов была разработана фармацевтическая субстанция «флакумин», обладающая желчегонным и спазмолитическим действием [1]. Препараты из сырья растения издавна применяются в народной медицине при заболеваниях кишечника, печени и жёлчевыводящих путей, при кожных заболеваниях и дерматомикозах и др. Экспериментально установлено, что экстракты из листьев обладают антиоксидантными свойствами [6].

Основным сепарационным методом анализа фенольных соединений в растительных объектах является высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Следует также отметить, что данный метод требует наличия большого количества стандартных образцов, особенно в условии отсутствия в сырье одного-двух характеристических компонентов. Учитывая, что в основном фенольные соединения представлены в сырье в виде гликозидов и сложных эфиров небольшого числа агликонов флавоноидов, то одним из решений данной проблемы может служить гидролиз указанных структур до характерного агликона и определение последнего с использованием ВЭЖХ. Это также важно для оценки качества лекарственного растительного сырья, так как качественный и количественный состав гликозидов может быть очень вариабельным в зависимости от места сбора и года заготовки.

Цель исследования – изучение возможности использования ВЭЖХ для анализа фенольных соединений листьев скумпии кожевенной.

Материал и методы исследования

Объектом исследования служили высушенные образцы сырья листьев скумпии кожевенной, заготовленные в 2013 году в фазу цветения растения на юго-восточном склоне горы Машук в городе Пятигорске Ставропольского края.

В работе были использованы стандартные образцы (СО) рутина (CAS 153-18-4), кверцетина (CAS 117-39-5), кемпферола (CAS 520-18-3), гиперозида (CAS 482-36-0), и феруловой кислоты (CAS 1135-24-6) с чистотой более 95 % (производитель – Sigma-Aldrich).

На первом этапе работы необходимо было установить наличие изучаемых фенольных соединений в извлечении из листьев скумпии кожевенной. Для этого около 2 г сырья (точная навеска), измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещали в плоскодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл, заливали 50 мл 70 % спирта этилового и нагревали с обратным холодильником на кипящей водяной бане в течение 1 ч с момента закипания спиртовой смеси в колбе. Полученное извлечение охлаждали до комнатной температуры и фильтровали в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводили объем тем же растворителем до метки и перемешивали. Перед вводом в хроматограф извлечение фильтровали через фильтр с диаметром пор 0,25 мкм. Параллельно готовили серию растворов стандартных образцов (СО) рутина, кверцетина, кемпферола, гиперозида и феруловой кислоты в 70 % спирте этиловом.

По 20 мкл извлечения и модельной смеси растворов СО вводили в хроматографическую систему «Стайер» (Аквилон, Россия – США – Чехия), снабженную колонкой «Luna C18» 150×4,6 мм (Phenomenex, США) с размером зерен 5 мкм. Элюирование осуществляли в градиентном режиме. Элюент А – ацетонитрил («Вектон», Россия, ОСЧ 2), элюент В – 2 % раствор кислоты муравьиной («Вектон», Россия, 99 %). Содержание ацетонитрила изменялось от 20 до 60 % за 40 мин, при расходе элюента 1 мл/мин. Детектирование проводили при длине волны 365 нм на УФ-детекторе [3, 5].

Далее необходимо было установить содержание в сырье идентифицированных фенольных соединений. Расчет проводили по площадям пиков соответствующих веществ, полученных при анализе извлечения из скумпии кожевенной и при анализе растворов их стандартных образцов.

Следующим этапом исследования было проведение кислотного гидролиза гликозидов и сложных эфиров флавоноидов. Для этого около 2 г (точная навеска) сырья помещали в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляли 94 мл спирта этилового 70 % и 6 мл концентрированной хлористоводородной кислоты («Вектон», Россия, ОСЧ 20-4). Колбу присоединяли к обратному холодильнику и нагревали на кипящей водяной бане в течение 3 часов. Затем колбу охлаждали до комнатной температуры и фильтровали в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводили объем до метки 70 % спиртом. Далее проводили ВЭЖХ-анализ согласно вышеизложенной методике.

Результаты исследования и их обсуждение

В извлечении без проведения гидролиза идентифицировано 5 фенольных соединений: оксикоричные кислоты – феруловая кислота; гликозиды флавоноидов – рутин, гиперозид; агликоны флавоноидов – кверцетин и кемпферол (рис. 1). В извлечении после кислотного гидролиза обнаружено только два исследуемых вещества: агликоны флавоноидов кверцетин и кемпферол (рис. 2).

Проведенная количественная оценка фенольных соединений до и после гидролиза (таблица) свидетельствует, что изучаемое сырье содержит флавоноиды в основном в виде гликозидов (гиперозид, рутин и другие). Данный факт подтверждается также значительным увеличением содержания кверцетина и кемпферола после проведения процедуры гидролиза. Практически полное разрушение феруловой кислоты после гидролиза, возможно, связано с жесткими условиями его проведения.

Результаты анализа фенольных соединений листьев скумпии кожевенной методом ВЭЖХ

Вещество

Содержание, %

До гидролиза

После гидролиза

Рутин

0,076 ± 0,004

Гиперозид

0,36 ± 0,02

Феруловая кислота

0,75 ± 0,04

Кверцетин

0,0130 ± 0,0007

1,44 ± 0,07

Кемпферол

0,000110 ± 0,000006

0,0150 ± 0,0008

pic_25.wmf

Рис. 1. ВЭЖХ – хроматограмма фенольных соединений листьев скумпии кожевенной из извлечения, полученного без гидролиза

pic_26.wmf

Рис. 2. ВЭЖХ – хроматограмма фенольных соединений листьев скумпии кожевенной из извлечения, полученного после кислотного гидролиза

Выводы

С использованием метода ВЭЖХ идентифицирован ряд фенольных соединений листьев скумпии кожевенной. Преобладающими веществами в извлечении являются гиперозид и феруловая кислота, а также обнаружены кверцетин и кемпферол в незначительных количествах.

В извлечении, полученном после проведения кислотного гидролиза, установлено значительное повышение содержания кверцетина и кемпферола, что свидетельствует о значительном содержании в сырье их производных (гликозиды, сложные эфиры). Использование указанного подхода может быть использовано для оценки качества сырья скумпии кожевенной.

Рецензенты:

Коновалов Д.А., д.фарм.н., профессор кафедры фармакогнозии, зам. директора по НИР, Пятигорский медико-фармацевтический институт, филиал, ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск;

Кодониди И.П., д.фарм.н., доцент кафедры органической химии, Пятигорский медико-фармацевтический институт, филиал, ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Пятигорск.

Работа поступила в редакцию 18.03.2015.


Библиографическая ссылка

Гриценко А.И., Сенченко С.П., Попова О.И. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ВЭЖХ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ЛИСТЬЕВ СКУМПИИ КОЖЕВЕННОЙ (Cotinus coggygria Scop.) // Фундаментальные исследования. – 2015. – № 2-9. – С. 1907-1910;
URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=37331 (дата обращения: 21.11.2017).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252