Четыреххлористый углерод (CCl4) используют в экспериментальных работах как модель острого токсического повреждения печени. Развивающаяся печеночная недостаточность, связанная с интенсификацией процессов перекисного окисления, продукцией и накоплением высокотоксичных метаболитов, приводит к некрозу гепатоцитов и фиброзу печени [1]. Одним из способов коррекции токсических повреждений является применение гепатопротекторов растительного происхождения [3]. Гепатопротекторное действие растительных экстрактов обеспечивается присутствием в их составе фенолкарбоновых кислот, кумаринов, флавоноидов, обладающих фармакологической активностью [4]. В связи с этим изучение гепатопротекторного действия экстрактов, полученных из растительного сырья, на данной модели является актуальной задачей.
Цель исследования – изучение биохимических параметров, характеризующих токсическое повреждение печени, при остром гепатотоксическом действии CCl4. Сравнивали гепатопротекторное действие карсила и сухого экстракта бересты березы повислой – Betula pubescens.
Материалы и методы исследования
Эксперименты выполнялись на самцах крыс Вистар массой 200–250 г (n = 45), полученных из вивария Новосибирского медицинского университета. Протокол исследования соответствовал правилам проведения работ с использованием экспериментальных животных (Приложение к приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 г. и приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.). Экстракт бересты березы из воздушно сухого сырья получали этанолом различной концентрации исчерпывающей экстракцией при нагревании на водяной бане.
Четыреххлористый углерод вводили внутрибрюшинно в 50 % масляном растворе однократно в дозе 0,2 мл/100 г массы тела животного. Контрольной группе животных вместо CCl4 вводили 50 % масляный раствор. Сухой экстракт бересты березы в крахмальной слизи вводили внутрижелудочно в дозе 100 мг/кг в течение 3-х дней предварительно перед введением CCl4. В качестве препарата сравнения использовали карсил («Sopharma») внутрижелудочно в дозе 100 мг/кг в течение 3-х дней предварительно перед введением CCl4. Материал для исследования забирали через сутки после введения CCl4.
Исследования проводили в сыворотке крови крыс. Белковые фракции оценивали методом электрофореза на ацетат-целлюлозных пленках, содержание общего белка определяли биуретовым методом. Концентрацию общего и прямого билирубина, мочевины и активность АлТ, ЩФ определяли с использованием наборов (PLIVA-Lachema Diagnosticum, Чехия), активность ММП-2,7 – по методу Nagase et al. [5] с использованием флуоресцентного субстрата (Calbiochem, США).
Полученные результаты обрабатывали статистически с использованием пакета программ «Statistica,ver. 6.0». Определяли среднее арифметическое (М), ошибку среднего (m); различия между группами оценивали с помощью t-критерия Стьюдента и считали значимыми при p < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Введение CCl4 снижало содержание общего белка сыворотки крови до 45,7 ± 5,15 г/л (64,0 ± 3,97 г/л) соотношение альбуминов к глобулинам до 1,0 ± 0,09 (1,5 ± 0,15), возрастала доля a1-, b2-глобулинов и снижалась доля g-глобулинов по сравнению с интактными животными (таблица).
Процентное содержание белковых фракций в сыворотке крови крыс при введении CCl4, карсила и экстракта березы
Группы |
Альбумины, % |
Глобулины, % |
||||
a1 |
a2 |
b1 |
b2 |
g |
||
1. Интактные (n = 20) |
48,8 ± 0,97 |
11,3 ± 0,54 |
5,5 ± 0,31 |
5,9 ± 0,33 |
15,3 ± 0,33 |
13,2 ± 0,57 |
2. CCl4 (n = 20) |
47,5 ± 1,92 |
15,6 ± 0,59 Р1-2< 0,05 |
6,0 ± 1,18 |
5,97 ± 0,55 |
18,0 ± 0,50 Р1-2 < 0,05 |
6,9 ± 0,81 Р1-2 < 0,05 |
3. CCl4 + карсил (n = 8) |
47,8 ± 1,02 |
13,15 ± 0,47 Р2-3 < 0,05 |
5,46 ± 0,46 |
8,37 ± 0,05 |
17,0 ± 0,24 |
8,2 ± 0,77 |
4. CCl4 + береза 100 мг (n = 12) |
42,8 ± 2,08 Р1-4< 0,05 |
16,04 ± 0,61 |
8,35 ± 1,21 |
6,5 ± 0,45 |
16,2 ± 0,59 Р2-4< 0,05 |
10,0 ± 1,18 Р2-4< 0,05 |
Предварительное введение карсила сохраняло содержание общего белка в норме 66,9 ± 5,3 г/л, снижало только процентное содержание a1-глобулинов, а введение экстракта березы достоверно снижало процентное содержание b2-глобулинов и увеличивало содержание g-глобулинов по сравнению с группой 2.
При введении CCl4 активность АлТ в сыворотке крови повышалась в 3,3 раза по сравнению с контрольной группой (1,8 ± 0,27 и 0,55 ± 0,05 ммоль/л∙ч, Р < 0,05 сответственно) и возрастала активность ЩФ (5696,4 ± 530,90 и 800,2 ± 80,12 нмоль/с∙л, Р < 0,05 соответственно). При этом увеличивалась концентрация общего билирубина (26,2 ± 3,14 и 7,5 ± 0,69 мкмоль/л, Р < 0,05 соответственно) и прямого билирубина (8,5 ± 4,55 и 2,5 ± 0,22 мкмоль/л, Р < 0,05 соответственно). На фоне предварительного введения карсила активность АлТ и ЩФ оставалась на высоком уровне (1,6 ± 0,21 ммоль/л/ч и 7032,9 ± 653,38 нмоль/с∙л соответственно). При введении экстракта коры березы активность АЛТ и ЩФ снижалась (0,8 ± 0,05 ммоль/л/ч и 3264,7 ± 368,15 нмоль/с/л соответственно, Р < 0,05). Введение карсила и экстракта березы не изменяло показатели общего и прямого билирубина. Определение мочевины в сыворотке крови не выявило достоверных изменений в исследуемых группах животных.
Активность ММП контрольной группы составила 190,4 ± 11,35 мкмоль/л∙ч. Введение CCl4 у крыс приводило к развитию токсического гепатита, которое сопровождалось повышением активности ММП (252,0 ± 11,84 мкмоль/л∙ч). Введение CCl4 на фоне карсила снижало активность ММП до контрольного уровня (202,8 ± 19,23 мкмоль/л∙ч, Р < 0,05). Введение сухого экстракта березы также приводило к достоверному снижению активности ММП (200,3 ± 12,25 мкмоль/л·ч, Р < 0,05).
Нами показано, что в условиях токсического повреждения печени, вызванного CCl4, происходит нарушение проницаемости мембран гепатоцитов (увеличение активности цитоплазматического фермента АЛТ), белок-синтетической функции печени (снижение общего белка), секреции билирубина в желчь (увеличение прямого билирубина), структуры межклеточного матрикса (увеличение активности ММП); подавление функции иммунокомпетентных клеток (снижение g-глобулинов). Нарастание активности ММП идет параллельно с экспрессией белков острой фазы (возрастала доля a1-, b2-глобулинов).
Ранее нами было изучено гепатопротекторное действие карсила и экстракта коры березы при экспериментальном повреждении печени, вызванном парацетамолом. Было показано, что карсил и экстракт коры березы сохраняли нормальные показатели процентного содержания общего белка, за счет альбуминов; снижали активность АЛТ, концентрацию прямого билирубина (показано только для экстракта березы) и активность ММП [2].
Исследование гепатопротекторного действие карсила и экстракта коры березы при экспериментальном повреждении печени, вызванном CCl4, показало, что карсил сохранял содержание общего белка в норме и снижал долю a1-глобулинов. Наибольшим эффектом обладал экстракт березы: в отличие от карсила он снижал долю b2-и увеличивал долю g-глобулинов, снижал активность АЛТ и ЩФ. Карсил и экстракт коры березы, улучшая состояние межклеточного матрикса, снижали активность ММП.
Выводы
1. Через 24 часа после внутрибрюшинного введения CCl4 в дозе 0,2 мл/100 г массы тела животного развивалась выраженная гипопротеинемия и увеличивалось процентное содержание белков острой фазы (a1, b2-глобулинов), снижалась доля g-глобулинов в сыворотке крови крыс.
2. Карсил сохранял концентрацию общего белка и снижал долю a1-глобулинов и активность ММП в сыворотке крови крыс.
3. Экстракт березы снижал долю b2- и увеличивал долю g-глобулинов, снижал активность АЛТ, ЩФ и активность ММП.
Рецензенты:
Поляков Л.М., д.м.н., профессор, зам. директора по научной работе ФГБУ «НИИ биохимии» СО РАМН, г. Новосибирск;
Пустоветова М.Г., д.м.н., профессор, зав. Центральной научно-исследовательской лабораторией ГБОУ ВПО НГМУ, г. Новосибирск.
Работа поступила в редакцию 07.03.2013.
Библиографическая ссылка
Иванова В.В., Лигостаева Ю.В., Потеряева О.Н., Потеряева О.Н., Русских Г.С., Грек О.Р., Шарапов В.И., Геворгян М.М. ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ РАСТИТЕЛЬНОГО ЭКСТРАКТА КОРЫ БЕРЕЗЫ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГЕПАТИТЕ, ВЫЗВАННОМ ЧЕТЫРЕХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 3-2. – С. 277-279;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=31325 (дата обращения: 17.08.2024).