Интерес к изучению маркеров апоптоза и в том числе к экспрессии ингибитора апоптоза bcl-2 при почечно-клеточном раке (ПКР) сохраняется на протяжении последних десятилетий.
Роль bcl-2 в развитии и прогрессии ПКР не совсем ясна и остается спорной [1, 16]. По данным различных авторов, экспрессия данного маркера в карциномах почки колеблется от 32 до 80% [5]. Есть мнения, что сверхэкспрессия bcl-2 может играть роль в туморогенезе рака почки и резистентности к химиотерапевтическим препаратам и радиационной терапии [7]. По данным Gobe G. и соавт. (2002), в опухолях, где наблюдалась высокая экспрессия bcl-2 апоптоз не обнаруживался, а когда экспрессия этого белка была низка или не была найдена, отмечался увеличенный уровень апоптоза.
В ряде работ была изучена взаимосвязь экспрессии bcl-2 и степени анаплазии ПКР. Zhang X. и соавт. (2000) обнаружили взаимосвязь между bcl-2 и градацией опухоли. По данным Гуторова С.Л. и соавт. (2007), при отсутствии экспрессии bcl-2 отмечалась тенденция к возрастанию степени анаплазии опухоли. Hindermann W. и соавт. (1997) показали, что для карциномы почки степени анаплазии G1 были характерны более высокие значения bcl-2, чем степеней G2-3. Этими авторами сделан вывод, что прогрессия рака почки от высокодифференцированного к низкодифференцированному сопровождается уменьшением экспрессии bcl-2. Аналогичные данные получили и другие исследователи [8]. В то же время Vasavada S.P. и соавт. (1998) не нашли ассоциации между экспрессией bcl-2 и градацией опухоли.
Исследованию взаимосвязи между активностью bcl-2 и клинической стадией опухоли посвящены немногочисленные работы. Oudard S. и соавт. (2002) обнаружили взаимосвязь высокой активности bcl-2 и низкой стадии заболевания. Сходные данные получили и другие авторы [8]. Однако другие авторы не обнаружили взаимосвязи экспрессии bcl-2 со стадией опу- холи [13].
В некоторых исследованиях описаны особенности экспрессии bcl-2 в различных гистологических вариантах ПКР. По этим данным экспрессия bcl-2 была взаимосвязана с гистологическим типом опухоли [14]. Paraf F. и соавт. (1995) показали, что большинство карцином светлоклеточного варианта ПКР было отрицательно на данный маркер или в них содержались редкие положительные клетки, а все папиллярные карциномы были положительны для bcl-2. Другие авторы не обнаружили корреляции маркера с гистологическим типом опухоли [15]. Так, не было никакого существенного увеличения иммунореактивности белка bcl-2 в саркоматоидных компонентах опухолей, по сравнению с другими компонентами [9].
Имеются работы посвященные изучению маркера bcl-2 в первичных опухолях при метастазировании. По данным Лоран О.Б. и соавт. (2008), для местнораспространенного и метастатического РП не характерны высокие уровни белка bcl-2. При местнораспространенном РП отсутствие антиапоптического фактора bcl-2 коррелирует с прогрессией заболевания. Аналогичные данные получил Шустицкий Н.А. (2007). Другие авторы не обнаружили взаимосвязи между экспрессией bcl-2 и возникновением метастазов [17].
Таким образом, несмотря на обилие работ по изучению ингибитора апоптоза bcl-2 при ПКР, полученные авторами данные противоречивы и поэтому характер иммуногистохимической экспрессии данного онкопротеина при РП нуждается в дальнейшем изучении.
Целью данной работы стало иммуногистохимическое выявление экспрессии ингибитора апоптоза bcl-2 при ПКР и поиск взаимосвязей активности маркера с клинико-анатомическими факторами прогноза.
Материал и методы исследования
Изучен операционный материал 49 больных ПКР. Средний возраст пациентов составил 57,4 ± 1,3 года. Мужчин было 29 (59,2%), женщин - 20 (40,8%). По гистологическому строению опухоли были представлены следующим образом: светлоклеточный рак - 33; зернистоклеточный рак - 4; папиллярный рак - 11 и веретенноклеточный (саркоматоидный) рак - 1.
При группировке опухолей по клиническим стадиям (Ι-ΙV) было выделено: Ι стадии (T1N0M0) соответствовали 27 (55%) наблюдения; ΙΙ стадии (T2N0M0) 2 (4%) наблюдение; ΙΙΙ стадии (T1N1M0, T2N1M0, T3N0M0, T3N1M0) - 10 (20,5%) и ΙV стадии (T4N0M0, T4N1M0, TлюбаяN2M1, TлюбаяNлюбаяM1) - 10 (20,5%). Степень злокачественности оценивали по Fuhrman S.A. и соавт (1982). Изученный материал включал 2 (4,2%) опухоли степени анаплазии G1; 17 (34,7%) опухолей степени анаплазии G2; 24 (49%) степени анаплазии G3 и 6 (12,2%.) степени G4. В 18 случаях имелись отдаленные и регионарные метастазы, в 31 случае метастазы отсутствовали.
Материал фиксировали в 10%-м нейтральном забуференном формалине на протяжении 12-24 часов. Гистологические препараты окрашивали гематоксилином и эозином, на коллаген по ван Гизон.
Морфометрические исследования проводили с использованием системы компьютерного анализа изображений, состоящей из микроскопа Leica DМЕ, цифровой камеры Leica EC3 (Leica Microsystems AG, Германия), персонального компьютера и программного обеспечения ВидеоТест - Морфология 5.2.
Уровень экспрессии молекулярно-биологического маркера Bcl-2 (клон 124, «DAKO» определяли при помощи иммуногистохимического метода по рекомендованным производителями протоколам. При оценке иммуногистохимического (ИГХ) окрашивания bcl-2 использовали полуколичественный метод: 0 баллов - отсутствие окрашивания; + (1 балл) - более 20% клеток со слабой интенсивностью окрашивания цитоплазмы; ++ (2 балла) - умеренное окрашивание цитоплазмы; +++ (3 балла) - более 20% с интенсивнным окрашиванием цитоплазмы; ++++ (4 балла) - интенсивное окрашивание цитоплазмы более чем 80% клеток. В тех случаях, когда интенсивность окрашивания варьировалась, например от + (1 балл) до ++ (2 балла), получали среднее - 1,5 балла. Когда выявляли равномерное окрашивание цитоплазмы всех клеток, тогда цифра, характеризующая интенсивность окрашивания, была круглой: + (1), ++ (2), +++ (3) или ++++ (4 балла).
Статистическую обработку материала проводили при помощи статистического пакета Statistica 6.0. При нормальном распределении данных при проверке статистических гипотез применяли методы параметрической статистики (t - test Стьюдента), а если полученные данные не соответствовали критериям нормального распределения (критерий Шапиро - Уилка W = 0,89, p < 0,01), то применяли тест Колмогорова - Смирнова или U-тест Манна - Уитни. Данные считали достоверными при р < 0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
Результат ИГХ - выявления ингибитора апоптоза bcl-2 был представлен мелкосетчатым, зернистым или диффузным коричневым окрашиванием цитоплазмы опухолевых клеток. Среди всех исследованных больных вне зависимости от пола, возраста, варианта ПКР и т.д. разброс значений экспрессии онкопротеина bcl-2 был от 0 до 4 баллов.
В целом среднее значение индекса bcl-2 во всей группе составило 1,8 ± 0,2 балла, что, по нашему мнению, не является высоким значением. Было установлено, что уровень ингибиции апоптоза в 32 опухолях (65,3%) был низким, а в 17 (34,7%) - высоким. При высоком уровне ингибиции апоптоза показатель bcl-2 в среднем составил 3,4 ± 0,1 балла. При низком уровне ингибиции апоптоза показатель был равен 1,0 ± 0,1 балла.
Сопоставление выраженности экспрессии bcl-2 c классическими клинико-анатомическими факторами прогноза при РП и позволило выявить некоторые взаимосвязи.
Корреляционный анализ выявил слабые, но недостоверные корреляции между bcl-2 и возрастом пациентов (r = 0,25; p = 0,1), клинической стадией (r = - 0,26; p = 0,1) и размером опухолевого узла (r = 0,25; p = 0,1). С наличием регионарных и дистантных метастазов была обнаружена слабая положительная корреляция (r = 0,37; p = 0,03). Наиболее сильная положительная корреляция была получена с гистологическим вариантом опухоли (r = 0,66; p = 0,0001). Не было обнаружено корреляционной взаимосвязи с полом больным (r = 0,07; p = 0,62) и градацией опухоли по Фурману (r = 0,03; p = 0,8).
Средние значения bcl-2 у мужчин составили 1,7 ± 0,2 баллов, у женщин - 2,0 ± 0,4 балла.
В зависимости от возраста средние показатели экспрессии bcl-2 у больных от 40 до 49 лет были 1,4 ± 0,4 балла, от 50 до 59 лет - 1,8 ± 0,4 балла, от 60 до 69 лет - 1,9 ± 0,4 балла и от 70 до 79 лет - 2,8 ± 0,4 балла. Таким образом, самые высокие показатели индекса маркера ингибиции bcl-2 наблюдали в старшей возрастной группе от 70 до 75 лет, а самые низкие в возрастной группе от 40 до 49 лет.
У пациентов с I клинической стадией заболевания среднее значение экспрессии bcl-2 составило 2,1 ± 0,3 балла, у больных со II стадией показатели были 2 балла, у пациентов с III стадией показатели составили 1,7 ± 0,5 баллы и у больных с IV стадией - 1,2 ± 0,4 балла. Таким образом, отмечается уменьшение экспрессии онкопротеина bcl-2
по мере увеличения клинической стадии процесса.
В зависимости от гистологического типа наименьшее среднее значение экспрессии bcl-2 было обнаружен при светлоклеточном варианте ПКР (1,2 ± 0,2 балла). Промежуточное положение занимали веретенноклеточный (2,0 ± 0,3 балла) и зернистоклеточный рак (2,5 ± 0,5 балла). Наибольшие показатели bcl-2 были отмечены при папиллярном раке (3,35 ± 0,2 балла) (табл. 1) (рисунок).
Экспрессия bcl-2 в зависимости от гистологического типа опухоли и наличия метастазов: а - отсутствие экспрессии bcl-2 в метастатическом светлоклеточном раке; б - наличие высокой экспрессии в местно-распространенном папиллярном раке. ИГХ окрашивание. Увеличение х 400
Таблица 1 Экспрессия bcl-2 в зависимости от гистологического варианта рака почки
|
Гистологический вариант ПКР |
Экспрессия bcl-2 (баллы) |
|
Светлоклеточный рак |
1,2 ± 0,2* |
|
Веретенноклеточный рак |
2,0 ± 0,3* |
|
Гранулярноклеточный рак |
2,5 ± 0,5* |
|
Папиллярный рак |
3,35 ± 0,2* |
Примечание. * - p < 0,05.
С увеличением степени ядерной атипии по Фурману отмечали тенденцию к уменьшению экспрессии bcl-2: при GI экспрессия составила 2 балла, при GII 1,7 ± 0,4 баллов, при GIII 1,7 ± 0,3 баллов и при GIV 1,9 ± 0,6 балла.
При размере опухоли < 7,0 см экспрессия маркера была 1,5 ± 0,3 балла, а при размере ≥ 7,0 см - 1,9 ± 0,2 балла.
У больных без развития регионарных и отдаленных метастазов экспрессия bcl-2 составила 2,1 ± 0,3 баллов, а при наличие метастазов активность онкопротеина снижалась до 1,1 ± 0,3 баллов (табл. 2) (см. рисунок).
Таблица 2 Экспрессия bcl-2 в зависимости от наличия регионарных и отдаленных метастазов
|
Отдаленные и регионарные метастазы |
Экспрессия bcl-2 (баллы) |
|
Без метастазов |
2,1 ± 0,3* |
|
С метастазами |
1,1 ± 0,3* |
Примечание. * - p < 0,05.
Таким образом, результаты проведенного исследования показали, что для ПКР, в целом, характерны низкие показатели экспрессии ингибитора апоптоза bcl-2. Наиболее значимые корреляционные взаимосвязи были обнаружены между экспрессией bcl-2, гистологическим типом опухоли и возникновением регионарных и отдаленных метастазов. Отсутствие экспрессии bcl-2 в опухолях высоких степеней ядерной атипии по Фурману может указывать на вероятное возникновение регионарных и отдаленных метастазов.
Рецензенты:
-
Высоцкий Ю.А. д.м.н., профессор, зав. кафедрой нормальной анатомии человека ГБОУ ВПО АГМУ, г. Барнаул;
-
Лепилов А.В. д.м.н., профессор каф. патологическая анатомия с секционным курсом ГБОУ ВПО АГМУ, г. Барнаул.
Работа получена редакцией 28.06.2012.
Библиографическая ссылка
Черданцева Т.М., Бобров И.П., Климачев В.В., Брюханов В.М., Лазарев А.Ф. ЭКСПРЕССИЯ ИНГИБИТОРА АПОПТОЗА BCL – 2 ПРИ ПОЧЕЧНО – КЛЕТОЧНОМ РАКЕ // Фундаментальные исследования. 2012. № 7-2. С. 415-419;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=30154 (дата обращения: 21.05.2025).