В последние годы в энзимологии особое внимание уделяется механизмам функционирования сложных молекул белков, предполагающих участие ионов двухвалентных металлов.
В исследовании метеллоферментов особый интерес представляет отделение металла от апофермента, сопровождающееся исчезновением или снижением ферментативной активности, а также последующая реактивация фермента путем добавления металла.
В этой связи нами было изучено влияние этимендиаминтетераацетата (ЭДТА), связывающего ионы двухвалентных металлов, на каталитическую активность липазы из Rhizopus neveus.
Уменьшение способности липазы расщеплять триглицериды наблюдалось при воздействии ЭДТА в концентрации 2,2·10-4 моль/л. Показано, что максимальный ингибирующий эффект ЭДТА имеет место при концентрации ингибитора 2,2·10 -2 моль/л.
Для исследования возможного вклада ионов двухвалентных металлов в термостабильность липазы были проведены эксперименты по термической инактивации фермента. Инкубацию липазы с растровом ЭДТА (2,2·10 -2 моль/л) осуществляли при t= 37 0С и при 40 0С. Через 10, 20, 30, 40 минут из реакционной смеси отбирали аликвоты и определяли остаточную липолитическую активность в стандартных условиях. Результаты экспериментов показали, что при взаимодействии липазы с ЭДТА при температуре 40 0 инактивация фермента более выражена, чем при оптимальной температуре гидролиза триглицеридов, что не исключает возможности участия ионов двухвалентных металлов в поддержании нативной конформации молекулы липазы, а также позволяет нам предположить, что данные ионы вносят значительный вклад в термостабильность липазы.
Нами также исследовано влияние ионов Са 2+ (раствор СаСl2 в концентрациях 10 -3 и 10-4 моль/л) на процесс реактивации активности липазы после угнетения ЭДТА. Для этой цели фермент после инкубации с реагентом пропускали через хроматографическую колонку, упакованную сефадексом G - 25, для удаления ЭДТА из смеси. Затем ферментный раствор инкубировали в течение 60 минут с раствором СаСl2 и определяли каталитическую активность в стандартных условиях. Показано, что липолитическая активность фермента полностью восстановилась, чему способствовало, по-видимому, возвращение оинов металла в состав Cа- связывающего домена молекулы фермента.
Работа представлена на IV общероссийскую конференцию с международным участием «Новейшие технологические решения и оборудование», г. Москва, 11-13 мая 2006 г. Поступила в редакцию 24.04.2006г.
Библиографическая ссылка
Ковалева Т.А., Трофимова О.Д., Багно О.П., Беленова А. ВЛИЯНИЕ ДВУХВАЛЕНТНЫХ МЕТАЛЛОВ НА ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЛИПАЗА, ВЫДЕЛЕННОЙ ИЗ RH.NEVEUS // Фундаментальные исследования. – 2006. – № 5. – С. 85-85;URL: https://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=5064 (дата обращения: 19.04.2024).