Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,074

БЕЗИНЪЕКЦИОННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ЛИМФАТИЧЕСКОГО РУСЛА НЕКОТОРЫХ ОРГАНОВ ОВЕЦ

Складнева Е.Ю., Медкова А.Е., Новицкий М.В., Кудашова Е.А., Романов В.М., Назарова Е.М.
Объектом нашего исследования служило лимфа­тическое русло глотки, пищевода, сетки, книжки, подвздошной и ободочной кишок, легких и шеи овец красноярской тонкорунной породы в постнатальном онтогенезе.

Для наиболее полного изучения гистотопографии лимфатического русла, а так же взаимоотношения его с кровеносными сосудами, из различных участков органов, и из регионарных лимфоузлов готовились гистологические срезы. Гистологический материал заливался в парафиновые блоки по методикам, опи­санным в руководствах Б. Ромейс (1954), В.Г. Елисеевым с соавт. (1967), Г.А.Меркуловым (1969), О.В.Волковой и Ю.К.Елецким (1982).

Из полученных блоков готовились продольные, поперечные и тангенциальные срезы толщиной от 3 до 7 мкм на санном микротоме МС-2. Готовые срезы окрашивались по Ван-Гизон, гематоксилин-эозином, на элластику по Вейгерту, азаном по Гейденгайну и серебром по методу Бильшовского-Грос.

Полученные гистологические препараты изуча­лись под световым микроскопом "Биолам-М".

Для детального изучения архитектоники, гисто­топографии и количества всех структурных элементов стенки лимфангионов интра- и экстраорганных лим­фососудов и капсулы регионарных лимфоузлов, из них изготавливались тотальные препараты по безинъ­екционной методике, предложенной А.В. Борисовым (1973).

Для приготовления тотального препарата из лимфатического сосуда, вначале, под бинокулярной лупой МБС-2 отпрепаровывался с помощью глазных скальпеля, пинцета и ножниц и препаровальных игл нужный лимфососуд и фиксировался в 7-10% рас­творе формалина в течении 12-24 часов. Затем, под бинокулярной лупой сосуд очищался от соединитель­ной ткани и рассекался продольно (мелкие сосуды, посткапилляры и капилляры не рассекались). После этого, препарат дополнительно фиксировался, промы­вался в проточной воде в течение 20-30 минут и ок­рашивался галлоцианин-хромовыми квасцами при температуре 37° С в течение 24-72 часов. Затем, пре­парат промывался в водопроводной воде, проводился через батарею спиртов возрастающей концентрации (по 20-30 минут в каждом), просветлялся в метиловом эфире салициловой кислоты и проводился через че­тыре порции ксилола (по 5-10 мин в каждой порции). Готовый препарат расправлялся на предметном стекле эндотелием кверху и заключался в полистерол.

По аналогичной схеме готовились тотальные препараты из капсулы лимфатических узлов.

На полученных препаратах определяли ориента­цию миоцитов и производили подсчет их количества с помощью окулярной сетки С.Б. Стефанова (1974) в поле зрения микроскопа "Биолам-М" при окуляре 7 и объективе 40.

Для электронномикроскопического исследования отбирались кусочки лимфатических сосудов и слизи­стой оболочки органов овец размером 1х1мм, сразу после убоя животного. Затем материал фиксировался в 1% растворе четырехокиси осмия на фосфатном буфере с добавлением 4,5% сахарозы (рН=7,2), дегид­рировался в этиловых спиртах возрастающей концен­трации и заключался в эпон. После этого на ультра­микротоме LKB-8800, получали полутонкие (толщина 1мкм) и ультратонкие (толщина 35-45нм) срезы. По­лутонкие срезы окрашивали толлуидиновым синим, заключали в полистерол и изучали под световым мик­роскопом. Ультратонкие срезы контрастировали в насыщенном водном растворе уранилацетата, окра­шивали цитратом свинца по Рейнолдсу и изучали в электронном микроскопе JOEL-1010 при ускоряющем напряжении 100кВ.

Все полученные в ходе исследования данные протоколировались, обрабатывались вариационно-статистическим методом Е.К.Меркурьева (1964) с помощью ЭВМ.


Библиографическая ссылка

Складнева Е.Ю., Медкова А.Е., Новицкий М.В., Кудашова Е.А., Романов В.М., Назарова Е.М. БЕЗИНЪЕКЦИОННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ЛИМФАТИЧЕСКОГО РУСЛА НЕКОТОРЫХ ОРГАНОВ ОВЕЦ // Фундаментальные исследования. – 2004. – № 2. – С. 155-156;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=4091 (дата обращения: 21.11.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.074