Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,222

ТРОМБОЦИТЫ У КРЫС ЛИНИИ SHR В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ФОРМИРОВАНИЯ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ

Сидехменова А.В. 1 Алиев О.И. 1 Анищенко А.М. 1 Шаманаев А.Ю. 1 Федорова Е.П. 1
1 Лаборатория фармакологии кровообращения ФГБНУ «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга»
Подъем артериального давления у крыс линии SHR в период с 5-й по 12-ю недели жизни происходил в два этапа: в период с 5-й по 6-ю недели и в период с 8-й по 9-ю недели. По количеству тромбоцитов и уровню тромбокрита между крысами SHR и WKY в данном возрастном периоде достоверных различий выявлено не было. На первом этапе подъема артериального давления у крыс линии SHR статистически значимо повышался показатель анизоцитоза тромбоцитов по сравнению с крысами линии WKY. Начиная со второго периода повышения артериального давления наряду с высоким уровнем анизоцитоза тромбоцитов у крыс линии SHR также наблюдалось увеличение среднего объема тромбоцитов по сравнению с данным показателем у крыс линии WKY. Полученные результаты показывают, что изменение морфологических параметров, отражающих функциональную активность тромбоцитов связано с этапами повышения артериального давления.
артериальная гипертензия
крысы SHR
крысы WKY
артериальное давление
тромбоциты
1. Мурашев А.Н. Оценка адекватности модели артериальной гипертонии на крысах для изучения гипотензивных лекарственных средств // Токс. вестн. – 2010. – № 5. – С. 36–41.
2. A global brief on Hypertension / WHO, 2013. – 40 p.
3. Alexandru N., Popov D., Georgescu A. Platelet dysfunction in vascular pathologies and how can it be treated // Thromb. Res. – 2012. – Vol. 129. – P. 116–126.
4. Briggs C. Quality counts: new parameters in blood cell counting // Jnl. Lab. Hem. – 2009. – Vol. 31. – P. 277–297
5. Bruschi G., Minari M., Bruschi M.E., Tacinelli L., Milani B., Cavatorta A., Borghetti A. Similarities of essential and spontaneous hypertension: volume and number of blood cells // Hypertens. – 1986. – Vol. – 8. – P. 983–989.
6. El Haouari M., Rosado J.A. Platelet function in hypertension // Blood Cells Mol Dis. – 2009. – Vol. 42. – P. 38–43.
7. Park Y., Schoene N., Harris W. Mean platelet volume as an indicator of platelet activation: methodological issues // Platelets. – 2002. – Vol. 13. – P. 301–306.
8. Vagdatli E., Gounari E., Lazaridou E., Katsibourlia E., Tsikopoulou F., Labrianou I. Platelet distribution width: a simple, practical and specific marker of activation of coagulation // Hippokratia. – 2010. – Vol. 14, № 1. – P. 28–32.

По данным ВОЗ, осложнения артериальной гипертензии вызывают 9,4 млн смертельных случаев в мире ежегодно [2]. При этом нарушения функции тромбоцитов служит причиной тромботических осложнений, связанных с гипертензией [3, 6].

Крысы линии SHR являются адекватной экспериментальной моделью для изучения механизмов формирования артериальной гипертензии и поиска новых лекарственных средств ее коррекции [1, 5]. Анализ литературы показал, что в настоящее время отсутствуют исследования, в которых изучена последовательная динамика изменения количественных показателей тромбоцитов у крыс с артериальной гипертензией по сравнению с нормотензивными животными от начала возрастания артериального давления до развития стойкой артериальной гипертензии.

В связи с этим целью нашего исследования являлось изучение количественных показателей и морфологических параметров тромбоцитов у линии SHR последовательно в процессе формирования артериальной гипертензии.

Материалы и методы исследования

Эксперименты проведены на 40 крысах-самцах линии SHR (spontaneously hypertensive rats) и 40 крысах-самцах линии Wistar-Kyoto (WKY) категории SPF, полученных из вивария ИБХ РАН, г. Пущино (Сертификат здоровья животных от 04.09.2014). В виварии НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга животные содержались в неполной барьерной системе при следующих параметрах окружающей среды: температура – + 22 ± 2 °С, относительная влажность – 50 ± 20 %, воздухообмен 12–15 объемов помещения в час, световой режим – 12:12 ч. Содержание животных и уход за ними осуществлялись в соответствии с правилами, изложенными в Европейской конвенции по защите позвоночных животных (Страсбург, 1986). Протокол исследования утвержден комиссией по контролю за содержанием и использованием лабораторных животных НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга (протокол № 72052014). Животные каждой линии были разделены по возрасту на 8 возрастных групп, соответствующих 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 неделям жизни, по 5 крыс в каждой группе.

Артериальное давление (АД) у крыс регистрировали неинвазивным методом на хвосте с помощью системы измерения артериального давления у мелких животных NIBP200A («Biopac Systems, Inc.», США). Данная система предназначена для измерения АД в реальном времени у бодрствующих животных. Запись и обработка данных производилась на компьютере с помощью программы «AcqKnowledge 4.2 for MP150».

Общее количество тромбоцитов (PLT, 109/л крови), средний объем тромбоцитов (MPV, fl) показатель анизоцитоза тромбоцитов (PDW) и тромбокрит (PCT) определяли с помощью автоматического гематологического анализатора «Mythic vet 18» (PZ CORMAY S.A.). Кровь забирали из насечек на хвосте в капиллярные пробирки «Microvette Sarstedt» (Германия) с K3EDTA.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ «Statistica 8.0». Данные представлены в виде M ± m, где M – среднее значение, m – стандартная ошибка среднего значения. Для оценки достоверности межгрупповых различий использовали непараметрические критерии Краскела-Уоллиса и Манна-Уитни.

Результаты исследования и их обсуждение

АД у крыс линии WKY в период с 5-й по 12-ю недели жизни оставалось стабильным: средние значения систолического артериального давления (САД) в эти сроки составляло 126 ± 2 мм рт. ст., диастолического артериального давления (ДАД) – 95 ± 2 мм рт. ст. Наблюдаемые в течение данного временного периода колебания АД не являлись значимыми, что подтверждается результатами статистического анализа (p = 0,08) (рисунок).

У крыс линии SHR была выявлена этапность формирования артериальной гипертензии. У 5-недельных крыс линии SHR АД не отличалось от показателей крыс WKY того же возраста. Начиная с 6-й недели жизни, наблюдалось увеличение АД у крыс линии SHR по сравнению с нормотензивными животными. Вместе с тем между 6 и 8 неделями жизни у крыс SHR, несмотря на повышенные величины АД, оно оставалось стабильным, что подтверждается отсутствием достоверных различий в этот период (p = 0,25). Среднее значение САД составляло 162 ± 3 мм рт. ст., ДАД – 133 ± 2 мм рт. ст. Начиная с 9-й недели жизни у крыс SHR наблюдалось прогрессивное повышение АД. К 12-й неделе жизни величина САД составляла 211 ± 7 мм рт. ст., ДАД – 171 ± 6 мм рт. ст.

Таким образом, подъем артериального давления у крыс линии SHR наблюдался с 6-й недели жизни и до конца исследования и происходил не монотонно, а ступенчато. Мониторинг артериального давления с 5-й по 12-ю неделю жизни у животных линии SHR позволил выделить два этапа повышения артериального давления: с 5-й по 6-ю неделю и с 9-й по 10-ю неделю.

В течение всего периода наблюдения общее количество тромбоцитов крови у крыс линии SHR статистически значимо не отличалось от значений у крыс линии WKY за исключением 9 недели (таблица). Тромбокрит у животных линии SHR достоверно не отличался от значений у крыс WKY в течение всего периода исследования. На 5-ю неделю жизни показатель анизоцитоза тромбоцитов у животных линии SHR и крыс линии WKY достоверно не отличался. Начиная с 6-й недели и до конца всего периода исследования наблюдалось статистически значимое увеличение PDW на 21–67 % у животных линии SHR по сравнению со значениями у крыс WKY. Повышение показателя анизоцитоза тромбоцитов у животных линии SHR совпадает с первым этапом возрастания артериального давления. Средний объем тромбоцитов у крыс линии SHR в период с 5-й по 8-ю недели жизни достоверно не отличался от значений у нормотензивных животных. С 9-й по 12-ю недели жизни было выявлено статистически значимое увеличение MPV у крыс линии SHR на 12–17 % по сравнению с крысами линии WKY. Достоверное увеличение среднего объема тромбоцитов у спонтанно гипертензивных животных относительно нормотензивных крыс линии WKY совпадало со вторым этапом повышения артериального давления и сохранялось до конца исследования (9–12 недели).

Измерение среднего объема тромбоцитов и показателя анизоцитоза является простым и легким способом оценки функции тромбоцитов [4, 7, 8]. Повышение MCV свидетельствует о наличии в кровотоке крупных тромбоцитов. По сравнению с более мелкими клетками, крупные тромбоциты содержат больше гранул, активнее агрегируют [4, 7, 8]. Повышение показателя анизоцитоза тромбоцитов также связано с увеличением функциональной активности тромбоцитов. E. Vagdatli и соавторы [8] связывают увеличение PDW у пациентов, имеющих достоверно высокую агрегацию тромбоцитов, с образованием у активированных клеток псевдоподий и изменением их размеров.

Таким образом, у крыс линии SHR выявлено, что изменение морфологических параметров, отражающих функциональную активность тромбоцитов связано с этапами повышения артериального давления. На первом этапе повышения артериального давления у крыс линии SHR наблюдалось увеличение показателя анизоцитоза тромбоцитов по сравнению с крысами WKY, что может свидетельствовать о появлении некоторого количества активированных тромбоцитов. Начиная со второго периода повышения артериального давления наряду с высоким уровнем анизоцитоза тромбоцитов у крыс линии SHR также происходило увеличение среднего объема тромбоцитов по сравнению с данным показателем у крыс линии WKY.

Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (соглашение № 14-25-00017).

Динамика общего количества тромбоцитов (PLT, 109/л крови), тромбокрита (PCT), среднего объема тромбоцитов (MPV, fl) и показателя анизоцитоза тромбоцитов (PDW) у нормотензивных крыс линии WKY и спонтанно гипертензивных крыс линии SHR

Возраст

Группа

PLT, 109/л крови

PCT

MPV, fl

PDW

5-я неделя

WKY

879,0 ± 86,9

0,55 ± 0,10

6,14 ± 0,49

21,36 ± 1,55

SHR

765,6 ± 81,6

0,50 ± 0,08

6,80 ± 0,29

26,50 ± 2,23

6-я неделя

WKY

934,1 ± 57,6

0,52 ± 0,04

5,60 ± 0,29

20,33 ± 0,91

SHR

960,7 ± 37,7

0,54 ± 0,02

5,64 ± 0,07

24,56 ± 0,90*

7-я неделя

WKY

1058,8 ± 70,8

0,57 ± 0,04

6,99 ± 0,36

16,85 ± 1,00

SHR

894,8 ± 73,5

0,56 ± 0,03

5,85 ± 0,07

28,22 ± 2,14*

8-я неделя

WKY

885,2 ± 33,9

0,54 ± 0,04

6,01 ± 0,24

19,01 ± 1,02

SHR

823,9 ± 39,9

0,46 ± 0,02

5,67 ± 0,15

26,59 ± 1,41*

9-я неделя

WKY

815,5 ± 24,26

0,44 ± 0,01

5,38 ± 0,10

23,38 ± 0,58

SHR

645,3 ± 30,93*

0,38 ± 0,02

6,02 ± 0,08*

36,39 ± 2,10*

10-я неделя

WKY

844,1 ± 65,6

0,43 ± 0,03

5,09 ± 0,05

25,92 ± 1,14

SHR

726,0 ± 54,1

0,38 ± 0,05

5,81 ± 0,17*

36,16 ± 2,00*

11-я неделя

WKY

861,7 ± 62,1

0,43 ± 0,03

4,98 ± 0,03

25,35 ± 0,86

SHR

757,2 ± 54,4

0,42 ± 0,03

5,63 ± 0,07*

36,72 ± 1,68*

12-я неделя

WKY

763,5 ± 42,8

0,41 ± 0,02

5,25 ± 0,11

25,89 ± 2,11

SHR

618,8 ± 83,7

0,38 ± 0,05

6,12 ± 0,19*

36,96 ± 2,84*

Примечание. * – p < 0,05 по сравнению со значениями у крыс линии WKY того же возраста.

sid1a.wmf

А)

sid1b.wmf

Б)

Систолическое (А) и диастолическое (В) артериальное давление у нормотензивных крыс линии WKY и спонтанно гипертензивных крыс линии SHR в период с 5-й по 12-ю неделю. Примечание. * – p < 0,05 по сравнению со значениями у крыс линии WKY того же возраста

Рецензенты:

Суслов Н.И., д.м.н., профессор, заведующий лабораторией фитофармакологии и специального питания, НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга, г. Томск;

Плотникова Т.М., д.б.н., профессор, профессор кафедры фармакологии, ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России, г. Томск.


Библиографическая ссылка

Сидехменова А.В., Алиев О.И., Анищенко А.М., Шаманаев А.Ю., Федорова Е.П. ТРОМБОЦИТЫ У КРЫС ЛИНИИ SHR В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ФОРМИРОВАНИЯ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ // Фундаментальные исследования. – 2015. – № 1-7. – С. 1439-1442;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=37987 (дата обращения: 19.08.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252