Научный журнал
Фундаментальные исследования
ISSN 1812-7339
"Перечень" ВАК
ИФ РИНЦ = 1,222

СООТНОШЕНИЕ ЛИМФАТИЧЕСКИХ (LYVE-1 +) И КРОВЕНОСНЫХ (CD34 +) СОСУДОВ ПРИ ГИПЕРКЕРАТОЗЕ НИЖНЕЙ ГУБЫ

Куликова И.С. 1 Бгатова Н.П. 1 Исакова Н.Б. 2 Прохожев В.Б. 2 Бородин Ю.И. 1 Коненков В.И. 1
1 ФГБУ «НИИ клинической и экспериментальной лимфологии» СО РАМН
2 Новосибирский областной онкологический диспансер ГБУЗ НСО
Методами световой микроскопии и иммуногистохимии исследованы биоптаты из очага поражения у пациентов с гиперкератозом нижней губы. Показана гетерогенность клеточного состава воспалительных инфильтратов при гиперкератозе нижней губы. Иммуногистохимическим окрашиванием на маркеры эндотелиоцитов лимфатических сосудов (LYVE-1) и кровеносных сосудов (CD34) выявлено, что в очаге поражения в 2,4 раза больше объемная плотность кровеносных сосудов по сравнению с лимфатическими. Отмечено, что под эпителием нижней губы и в области воспалительных инфильтратов очага поражения объемные плотности кровеносных и лимфатических сосудов достоверно не различаются. В области красной каймы нижней губы показано наибольшее содержание не только кровеносных, но и лимфатических сосудов. Предполагается, что выявленные в области красной каймы LYVE + клетки могут быть клетками-предшественниками лимфангиогенеза.
гиперкератоз нижней губы
CD34+- и LYVE-1+- сосуды
LYVE-1+-клетки
1. Коненков, В. И., Бородин Ю.И., Бгатова Н.П. Молекулярные маркеры лимфатических и кровеносных сосудов при развитии опухоли и мишени блокирования метастазов // Вопросы онкологии. – 2011. – т. 57. – № 3. – С. 295–301.
2. Banerji S., Ni J., Wang S.X., Clasper S., Su J., Tammi R., Jones M., Jackson D.G. // J. Cell Biol. – 1999. Vol. 144, № 4. – P. 789–801.
3. Brennan M., Migliorati C.A., Lockhart P.B., Wray D., Al-Hashimi I., Axell T. // Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. – 2007. – Vol. 103, № 19. – P. 1–12.
4. Cunnick G.H., Jiang W.G., Gomez K.F., Mansel R.E. // Histol. Histopathol. – 2002. – Vol. 17. – P. 863–870.
5. Kerjaschki D. The crucial role of macrophages in lymphangiogenesis. // J. Clin. Invest. – 2005. – Vol. 115. –P. 2316–2319.
6. Marocchio L.S., Lima J., Sperandio F.F., Corrêa L., de Sousa S.O. // J Oral Sci. – 2010. – Vol. 52, № 2. – P. 267–273.
7. Moretti A., Vitullo F., Augurio A., Pacella A., Croce A. // Acta Otorhinolaryngol Ital. – 2011. – Vol. 31, № 1. – P. 5–10.
8. Prevo R., Banerji S., Ferguson D.J., Clasper S., Jackson D.G. // Biol Chem. – 2001. – Vol 276, № 22. – P. 19420–19430.
9. Schroedl F., Brehmer A., Neuhuber W.L., Kruse F.E., May C.A, Cursiefen C. // IOVS – 2008. – Vol. 49, № 12 – P. 5222–5229
10. von Bubnoff D., Zahn S., Wenzel J., Wilms H., Bieber T., Lgјftl M. // Pathol Int. – 2012. – Vol. 62, № 2. – P. 105–111.
11. Xu H., Chen M., Reid D.M., Forrester J.V. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. – 2007. – Vol. 48 – P. 2162–2171.
12. Yuanming L., Feng G., Lei T., Ying W. // Arch. Med. Res. – 2007. – Vol. 38, № 1. – P. 106–112.
13. Zhang H., Tse J., Hu X., Witte M., Bernas M., Kang J., Tilahun F., Hong Y.K., Qiu M., Chen L. // Invest Ophthalmol Vis Sci. – 2010. – Vol. 51. – P. 6157–6161.
14. Zizzi A., Aspriello S.D., Ferrante L., Stramazzotti D., Colella G., Balercia P., Muzio L.L., Piemontese M., Goteri G., Rubini C. // Oral Dis. – 2013. – Vol. 19, № 1. – P. 92–99.

В последнее время значительно возросла частота злокачественных заболеваний слизистой оболочки рта и губ [3, 6, 10]. Известно, что рак губы диагностируется чаще всего на 3–4 стадиях, поэтому актуальной является ранняя диагностика злокачественного роста, что позволит избежать травмирующих оперативных вмешательств и возможного метастазирования [7]. Морфологическая и клиническая диагностика предраковых состояний очень сложны. С клинической точки зрения к предраковым состояниям относят любые хронические заболевания, сопровождающиеся образованием в тканях очагов избыточной пролиферации клеток, на фоне которых может развиться рак. Основываясь на стандартных способах диагностики опухолевого процесса – определении типа рака губы, стадии заболевания, степени злокачественности ‒ целесообразным является применение новых современных методов и комплексный подход к характеристике опухолевого процесса. Новым подходом может стать изучение ангио- и лимфангиогенеза в пораженном участке по локализации лимфатических сосудов с использованием моноклональных антител.

Целью исследования было морфологическое изучение структуры нижней губы у пациентов с гиперкератозом с выявлением маркеров эндотелиоцитов лимфатических (LYVE-1+) и кровеносных (CD34+) сосудов.

Материал и методы исследования

В исследование были включены 22 пациента с гиперкератозом нижней губы в возрасте от 48 до 93 лет. Среди отмеченных пациентов женщины составляли 9 %, мужчины – 91 %. Средний возраст мужчин был 66,7 ± 5,8 лет, а женщин – 71,5 ± 7,9 лет. Биоптаты нижней губы из очага поражения фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина, обрабатывали по стандартной гистологической методике и заливали в парафин. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Иммуногистохимическое выявление маркера эндотелиоцитов лимфатических капилляров LYVE-1 и маркера эндотелиоцитов кровеносных сосудов – CD34 проводили на парафиновых срезах толщиной 3–4 мкм. Все этапы иммуногистохимической реакции (депарафинизация, демаскировка, инкубация с первичными антителами и т.д.) проводили в автоматическом режиме на аппарате BENCHMARK/XT (Ventana). Использовали моноклональные антитела к CD34 («Novocastra») и к LYVE-1 («Abcam»). Полученные препараты нижней губы изучали на световом микроскопе «Leiсa DM», фотографировали с помощью компьютерной программы «Аvigion». Микрофотографии морфометрировали с помощью компьютерной программы Image J. Оценивали объемную плотность кровеносных и лимфатических сосудов, численную плотность клеток воспалительного инфильтрата: нейтрофилов, макрофагов, лимфоцитов, плазматических клеток. Использовали закрытую тестовую систему из 315 точек. Цифровые данные обрабатывали с использованием общепринятых методов статистики, вычисляя среднюю арифметическую величину (М), ошибку репрезентативности средней величины (m) и уровень значимости различий средних величин (р) на основании t-критерия Стьюдента для уровня достоверности 95 % (p < 0,05).

Результаты исследования и их обсуждение

При анализе биоптатов пациентов с гиперкератозом нижней губы отмечали крупные кератогиалиновые гранулы в цитоплазме клеток шиповатого слоя эпителия, деструкцию ядер эпителиоцитов, имели место эпителиальные клетки с увеличенными размерами ядер, гипертрофированными ядрышками и клетки в состоянии митоза. Наблюдали пролиферирующие клетки за пределами эпителия. Выявляли воспалительные инфильтраты под эпителием нижней губы. Имела место гетерогенность клеточного состава инфильтратов в зависимости от локализации в пределах очага поражения нижней губы. В среднем в составе инфильтратов было лимфоцитов – 35,44 ± 0,25 %; нейтрофилов – 11,17 ± 0,43 %, плазматических клеток – 19,75 ± 0,63 %; макрофагов – 4,50 ± 0,18 %. В составе инфильтратов могли преобладать плазматические клетки, которые в отдельных участках составляли 90 % от общего числа клеток. В некоторых участках плазматические клетки составляли 68,32 ± 0,78 %; лимфоциты – 15,02 ± 0,42 %; нейтрофилы – 4,55 ± 0,57 %; макрофаги – 2,47 ± 0,24 %.

Просветы кровеносных и лимфатических сосудов были расширены как на границе с очагом поражения нижней губы, так и в пределах воспалительных инфильтратов. Определение объемной плотности CD34+ кровеносных сосудов и LYVE+ лимфатических сосудов позволило выявить преобладание кровеносных сосудов над лимфатическими. Объемная плотность лимфатических сосудов была в 2,4 раза меньше, чем кровеносных (табл. 1).

Таблица 1

Соотношение лимфатических и кровеносных сосудов в переходной зоне нижней губы у пациентов с гиперкератозом при выявлении маркеров LYVE-1 и CD34 (М ± m)

Параметры

Гиперкератоз

Лимфатические сосуды

(LYVE-1 +) (Vv) %

1,84 ± 0,65*

Кровеносные сосуды(CD34 +) (Vv) %

4,52 ± 1,16

Vv кровенос.

Vv лимфатич.

2,46 ± 0,33

Примечания: Vv – объемная плотность сосудов (%); * – P < 0,05 по сравнению с кровеносными сосудами.

Исследование распределения сосудов в пределах очага поражения нижней губы показало, что наибольшее число кровеносных и лимфатических сосудов расположено в области красной каймы губ (табл. 2). Под эпителием преобладающими были кровеносные сосуды, а в зоне локализации воспалительных инфильтратов в равной мере выявлялись кровеносные и лимфатические сосуды (рис. 1).

Таблица 2

Распределение кровеносных и лимфатических сосудов в переходной зоне нижней губы при гиперкератозе (М ± m)

 

Красная кайма губы

Соединительнотканные сосочки

Область воспалительной инфильтрации

Кровеносные сосуды (Vv) %

6,13 ± 1,04

4,71 ± 0,82

2,05 ± 0,55

Лимфатические сосуды (Vv) %

2,03 ± 0,70*

1,10 ± 0.66*

1,09 ± 0,62

Примечания: Vv – объемная плотность сосудов (%).* – P < 0,05 по сравнению с кровеносными сосудами.

а)pic_31.tif б)pic_32.tif

в)pic_33.tif г)pic_34.tif

д)pic_35.tif е)pic_36.tif

Рис. 1. Иммуногистохимическое выявление кровеносных (CD34 +) и лимфатических (LYVE-1+) сосудов при гиперкератозе нижней губы. Увеличение 10×40:а, в, д – кровеносные (CD34+) cосуды; б, г, е – лимфатические (LYVE-1 +) сосуды а,б – сосуды под эпителием нижней губы; в, г – сосуды в воспалительном инфильтрате; д, е – сосуды, расположенные на уровне красной каймы губы

В области красной каймы нижней губы линии выявляли отдельные LYVE + клетки и группы LYVE + клеток (рис. 2). По морфологии данные клетки определялись как моноциты и макрофаги (см. рис. 2)

По мнению авторов [11], данные клетки могут быть оценены как клетки-предшественники лимфангиогенеза. При иммуногистохимическом выявлении лимфатических сосудов в оболочках глаза было обнаружено большое число LYVE-1+клеток, не относящимся к эндотелиальным клеткам ни по фенотипу, ни по расположению. Фенотипирование данных клеток показало, что они имеют костномозговое происхождение и окрашиваются на маркеры макрофагов. Авторы полагают, что популяции LYVE-1+-макрофагов являются гемопоэтическими предшественниками эндотелиоцитов лимфатических сосудов, при их формировании De novo в условиях патологии [11]. Другими авторами было показано, что LYVE-1 + -клетки являются CD68+-макрофагами и могут быть вовлечены в метаболизм гиалуроновой кислоты и способствовать формированию временных лимфатических каналов при воспалительных процессах [9]. По мнению Kerjaschki D. [5], макрофаги поддерживают лимфангиогенез 2 различными способами – трансдифференцировкой и непосредственным включением в эндотелиальную выстилку сосуда, или стимулируя деление предсуществующих эндотелиальных клеток лимфатических сосудов.

Маркеры кровеносных сосудов известны давно и CD34 признан цитоспецифичным маркёром эндотелия кровеносных сосудов, стабильно присутствующим как в эндотелии крупных и средних сосудов, так и эндотелии капилляров [14]. В последнее время идентифицированы молекулы, которые могут быть использованы как маркеры лимфатического эндотелия, в частности, гиалуронановый рецептор LYVE-1 [1,8,13]. Молекула LYVE-1 располагается на люминальной поверхности стенки лимфатического сосуда и полностью отсутствует в кровеносных сосудах [2]. Выявление LYVE-1 рассматривается как новый лимфатический маркер и новый подход, позволяющий оценить лимфангиогенез [4]. Показано, что плотность лимфатических сосудов (по данным иммуногистохимического анализа) коррелирует с факторами лимфангиогенеза и метастазом в лимфатический узел [12]. В нашем исследовании при использовании иммуногистохимических маркеров кровеносных (CD34+) и лимфатических (LYVE-1) сосудов определена объемная плотность и соотношение сосудов в зависимости от локализации при гиперкератозе нижней губы. Выявлены LYVE-1+-клетки в области красной каймы нижней губы, что возможно связано с образованием новых лимфатических сосудов.

а) pic_37.tif б) pic_38.tif

Рис. 2. LYVE-1 + клетки в области красной каймы нижней губы при гиперкератозе. Увеличение 10×100:а – одиночные клетки; б – цепочка клеток

Заключение

Гиперкератоз нижней губы характеризуется гетерогенностью клеточного состава воспалительных инфильтратов в очаге поражения. В составе инфильтратов преобладающими являются лимфоциты и плазматические клетки. Иммуногистохимическое выявление маркеров эндотелиоцитов лимфатических сосудов (LYVE-1+) и кровеносных сосудов (CD34+) показало, что в очаге поражения в 2,4 раза больше объемная плотность кровеносных сосудов по сравнению с лимфатическими. Под эпителием нижней губы и в области воспалительных инфильтратов очага поражения объемные плотности кровеносных и лимфатических сосудов достоверно не различаются. В области красной каймы нижней губы отмечено наибольшее содержание не только кровеносных, но и лимфатических сосудов. Выявленные в области красной каймы LYVE + клетки могут быть клетками-предшественниками лимфангиогенеза.

Рецензенты:

Майбородин И.В., д.м.н., профессор, ведущий научный сотрудник лаборатории стволовой клетки Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Центр новых медицинских технологий, г. Новосибирск;

Лушникова Е.Л., д.б.н, профессор, ФГБУ «Научно-исследовательский институт региональной патологии и патоморфологии» СО РАМН, г. Новосибирск.

Работа поступила в редакцию 14.02.2013.


Библиографическая ссылка

Куликова И.С., Бгатова Н.П., Исакова Н.Б., Прохожев В.Б., Бородин Ю.И., Коненков В.И. СООТНОШЕНИЕ ЛИМФАТИЧЕСКИХ (LYVE-1 +) И КРОВЕНОСНЫХ (CD34 +) СОСУДОВ ПРИ ГИПЕРКЕРАТОЗЕ НИЖНЕЙ ГУБЫ // Фундаментальные исследования. – 2013. – № 3-1. – С. 101-105;
URL: http://fundamental-research.ru/ru/article/view?id=31155 (дата обращения: 20.08.2019).

Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»
(Высокий импакт-фактор РИНЦ, тематика журналов охватывает все научные направления)

«Фундаментальные исследования» список ВАК ИФ РИНЦ = 1.252