Рак шейки матки представляет собой злокачественное перерождение эпителия в виде различного рода экзофитных, эндофитных или смешанных разрастаний, способных к инфильтрации окружающих тканей органов и метастазированию в отдаленные органы. При экзофитном варианте роста опухоли на шейке матки видны разрастания по типу цветной капусты красного, серо-розового или белесоватого цвета, легко разрушающиеся и кровоточащие при прикосновении. Эта форма рака, как правило, диагностируется на ранних стадиях развития. При эндофитном росте опухоли, развивающейся в канале шейки матки, шейка увеличена, бочкообразной формы, с неровной бугристой поверхностью, неравномерной розово-мраморной окраски. Диагностика эндофитной формы рака на ранних стадиях развития часто затруднена.
В настоящее время считается общепризнанным, что онкобелок Е7, экспрессирующийся высокоонкогенными типами ВПЧ 16 и 18 типа, является специфическим маркером неопластических процессов в тканях шейки матки [1, 3, 4]. Его повышенная экспрессия, определяемая иммуногистохимическими методами, регистрируется практически во всех (98,3 %) биопсийных образцах рака шейки матки [8], в то время как в нормальных эпителиальных клетках цервикальной зоны онкобелок Е7 не синтезируется. Отмечено, что у пациенток с ВПЧ-инфекцией отмечается выраженный скачок экспрессии онкобелка Е7, определяемого в мазке из цервикального канала, при переходе от стадии интраэпителиальной неоплазии низкой степени к интраэпителиальной неоплазии высокой степени [7].
Целью настоящего исследования явилось изучение содержания половых гормонов, их метаболитов, стероидсвязывающего белка и пролактина в тканях шейки матки при эндофитной и экзофитной формах роста опухоли в зависимости от экспрессии белка Е7.
Материалы и методы исследования
Были изучены ткани опухоли и визуально неизмененной ткани, полученные при оперативном лечении 46 больных раком шейки матки (эндофитной и экзофитной формы роста) T1б-2аN0M0 стадии процесса. Стадирование рака шейки матки проводилось в соответствии с классификацией TNM и FIGO. Диагностика рака основывалась на результатах гистологического исследования в соответствии с отраслевыми стандартами и алгоритмами объемов диагностики и лечения злокачественных новообразований в онкологии [5]. Критерием отбора больных являлся морфологически подтвержденный диагноз рака шейки матки. По гистологической структуре опухоли при обоих вариантах роста верифицированы как плоскоклеточный рак без ороговения.
Распределение больных по возрасту приведено в табл. 1.
Таблица 1
Возрастной состав больных с различными вариантами роста рака шейки матки
|
Возрастные интервалы |
31–40 лет |
41–50 лет |
50–55 лет |
|||
|
абс. |
% |
абс. |
% |
абс. |
% |
|
|
Экзофитная форма (n = 24) |
10 |
41,7 |
10 |
41,7 |
4 |
16,6 |
|
Эндофитная форма (n = 22) |
10 |
45,5 |
2 |
9,0 |
10 |
45,5 |
Обращает внимание, что пик возраста при экзофитной форме рака шейки матки приходился на период 31–50 лет (медиана – 40,5 ± 4,2 года).
В 10 % цитозольных фракциях, приготовленных на 0,1 М калий-фосфатном буфере рН 7,4, содержащем 0,1 % Твин-20 и 1 % БСА методом твердофазного иммуноферментного анализа определяли: уровень эстрона, эстрадиола, свободного эстриола, свободного и общего тестостерона, прогестерона, пролактина, сексстероидсвязывающего глобулина (ССГ) – (Хема, Россия), метаболитов эстрогенов 2-ОНЕ1 и 16α-ОНЕ1 (IBL, International Gmbh, Германия), онкобелка Е7 ВПЧ 16 и 18 типа (Биомед, Россия).
Статистический анализ результатов проводили с помощью пакета Statistica (версия 8). Оценка достоверности произведена с использованием t-критерия Стьюдента. Уровень Р < 0,05 принимали как значимый. При этом соблюдались общие рекомендации для медицинских исследований.
Результаты исследования и их обсуждение
В нашем исследовании экспрессия белка Е7 обнаружена в 75 % образцов ткани рака шейки матки при экзофитной форме роста и в визуально неизмененной ткани – в 62,5 % образцов. При эндофитной форме роста – соответственно в 63,6 и 18,2 % образцов (табл. 2, 3).
Таблица 2
Содержание гормонов, их метаболитов и стероидсвязывающего глобулина в тканях шейки матки при эндофитном росте опухоли в зависимости от Е7
|
Показатели |
Ткань опухоли |
Визуально неизмененная ткань |
||
|
Е7+ |
Е7- |
Е7+ |
Е7- |
|
|
Эстрон, пг/г |
602,8 ± 53,61 |
244,3 ± 19,7 |
423,7 ± 41,6 |
454,1 ± 43,8 |
|
Эстрадиол, нг/г |
0,7 ± 0,0581 |
0,5 ± 0,052 |
0,6 ± 0,0531 |
0,4 ± 0,047 |
|
Эстриол св., нг/г |
3,6 ± 0,03 |
3,6 ± 0,032 |
4,3 ± 0,041 |
3,5 ± 0,03 |
|
Тестостерон общий, нг/г |
25,1 ± 2,31 |
11,6 ± 1,3 |
14,3 ± 1,21 |
9,9 ± 0,8 |
|
Тестостерон свободный, пг/г |
49,9 ± 5,11 |
21,9 ± 2,2 |
24,0 ± 2,1 |
25,8 ± 2,7 |
|
Прогестерон, нг/г |
13,3 ± 1,11 |
23,6 ± 2,5 |
15,4 ± 1,3 |
17,1 ± 1,8 |
|
Пролактин, нг/г |
883,4 ± 87,6 |
739,5 ± 74,1 |
534,7 ± 51,81 |
224,6 ± 21,3 |
|
ССГ, нмоль/г |
58,2 ± 5,31 |
37,2 ± 3,6 |
150,6 ± 13,81 |
87,6 ± 7,9 |
|
2-ОНЕ1, нг/г |
1,1 ± 0,11 |
1,9 ± 0,2 |
1,0 ± 0,081 |
2,6 ± 0,3 |
|
16α-ОНЕ1,нг/г |
1,4 ± 0,15 |
1,4 ± 0,13 |
0,8 ± 0,061 |
1,6 ± 0,15 |
|
2-ОНЕ1/16α-ОНЕ1 |
0,8 ± 0,061 |
1,4 ± 0,1 |
1,3 ± 0,111 |
1,6 ± 0,14 |
Примечание. 1 – Достоверно по отношению к показателю в ткани без экспрессии Е7. Уровень показателей нормирован на грамм влажной ткани.
Результаты изучения содержания стероидных гормонов в тканях шейки матки при эндофитной и экзофитной формах роста опухоли в зависимости от экспрессии белка Е7 представлены в табл. 2, 3.
В опухолевой ткани эндофитных опухолей при экспрессии Е7 обнаружен повышенный уровень эстрона и эстрадиола в 2,5 и 1,4 раза соответственно по сравнению с показателями в ткани опухоли без экспрессии белка Е7 (табл. 2). Уровень эстриола не связан с экспрессией Е7. Содержание тестостерона как общей, так и свободной формы повышается в ткани опухоли эндофитных образований, экспрессирующей Е7 в 2,2 и 2,3 раза соответственно. При этом отмечено снижение синтеза прогестерона в 1,8 раза и повышение ССГ – в 1,6 раза. Достоверно не изменяет экспрессия Е7 содержание пролактина.
Таблица 3
Содержание гормонов, их метаболитов и стероидсвязывающего глобулина в тканях шейки матки при экзофитном росте опухоли в зависимости от Е7
|
Показатели |
Ткань опухоли |
Визуально неизмененная ткань |
||
|
Е7+ |
Е7– |
Е7+ |
Е7– |
|
|
Эстрон, пг/г |
420,6 ± 41,71 |
250,1 ± 23,8 |
602,7 ± 61,3 |
550,4 ± 52,8 |
|
Эстрадиол, нг/г |
0,8 ± 0,071 |
0,5 ± 0,06 |
1,3 ± 0,151 |
0,5 ± 0,04 |
|
Эстриол св., нг/г |
4,0 ± 0,361 |
3,2 ± 0,3 |
3,4 ± 0,35 |
3,8 ± 0,4 |
|
Тестостерон общий, нг/г |
35,9 ± 3,31 |
14,2 ± 1,5 |
17,0 ± 1,6 |
17,5 ± 1,8 |
|
Тестостерон свободный, пг/г |
44,9 ± 4,31 |
14,3 ± 1,3 |
44,7 ± 4,1 |
44,8 ± 4,5 |
|
Прогестерон, нг/г |
24,0 ± 2,7 |
19,8 ± 2,1 |
21,5 ± 2,3 |
17,5 ± 1,9 |
|
Пролактин, нг/г |
731,0 ± 68,41 |
264,0 ± 23,8 |
565,2 ± 51,41 |
379,5 ± 36,9 |
|
ССГ, нмоль/г |
67,8 ± 6,31 |
52,2 ± 4,7 |
120,0 ± 11,6 |
105,5 ± 9,8 |
|
2-ОНЕ1, нг/г |
1,4 ± 0,13 |
1,4 ± 0,15 |
1,9 ± 0,2 |
1,9 ± 0,17 |
|
16α-ОНЕ1, нг/г |
0,93 ± 0,071 |
1,27 ± 1,1 |
1,0 ± 0,1 |
1,1 ± 0,12 |
|
2-ОНЕ1/16α-ОНЕ1 |
1,5 ± 0,151 |
1,1 ± 0,1 |
1,9 ± 0,2 |
1,8 ± 0,17 |
Примечание. 1 – Достоверно по отношению к показателю в ткани без экспрессии Е7. Уровень показателей нормирован на грамм влажной ткани.
Уровень 2ОНЕ1 снижен почти в 2 раза при неизменном содержании 16α-ОНЕ1. Однако понятно, что под влиянием экспрессии Е7 метаболизм эстрогенов смещен в сторону образования 16α-ОНЕ1, о чем свидетельствует коэффициент соотношения 2-ОНЕ1/16α-ОНЕ1. Последний снижен в 1,8 раз относительно показателя в опухолевой ткани эндофитных опухолей без экспрессии Е7. В исследованиях показано, что повышенное образование 16α-гидроксистерона, сопряженное с влиянием ВПЧ на конверсию эстрадиола в направлении образования этого метаболита, стимулирует высокий синтез онкобелка Е7 [6]. В свою очередь белок Е7 активирует механизмы патологической пролиферации клеток и блокирует противовирусную иммунологическую защиту [2].
В опухолевой ткани экзофитных новообразований при экспрессии Е7 уровень эстрона, эстрадиола и эстриола повышены соответственно в 1,7, 1,6 и 1,3 раза относительно ткани без экспрессии Е7 (табл. 3). Андрогеновый статус ткани экзофитных опухолей меняется при экспрессии Е7: уровень общего и свободного тестостерона повышается – в 2,5 и 3,1 раза соответственно. Экспрессия Е7 усиливает синтез ССГ в 1,3 раза. Не выявлено изменений в уровне прогестерона, а содержание пролактина существенно, в 2,8 раза повышено. Уровень «агрессивного» метаболита 16α-ОНЕ1 снижен при экспрессии Е7 при неизменном уровне 2ОНЕ1. При этом коэффициент соотношения метаболитов повышен в 1,4 раза.
Однако при однонаправленности изменений гормонального статуса в опухолевых тканях отмечена различная степень их выраженности при эндофитном и экзофитном вариантах роста. Повышение эстрогенов, особенно эстрона, выражено больше (в 1,4 раза) в образцах эндофитных образований. При этом повышение уровня общего и свободного тестостерона в ткани эндофитных опухолей менее значительно – на 15,0 и 25,8 % соответственно, чем в экзофитных опухолях.
В визуально неизмененной ткани эндофитных образований шейки матки экспрессия Е7 коррелирует с повышением содержания эстрадиола и эстриола в 1,5 и 1,2 раза, уровня общего тестостерона – в 1,4 раза, пролактина – в 2,4 раза. Уровень ССГ повышен в визуально неизмененной ткани эндофитных образований в 1,7 раза. Так же, как и в опухолевой, в визуально неизмененной ткани снижен уровень 2ОНЕ1 в 2,6 раза и коэффициента 2-ОНЕ1/16α-ОНЕ1 в 1,2 раза.
Экспрессия белка Е7 меняет метаболизм визуально неизмененной ткани экзофитных опухолей шейки матки в сторону повышенного синтеза эстрадиола – в 2,6 раза и образования пролактина в 1,5 раза. Уровень остальных гормонов в этой ткани не зависит от экспрессии Е7.
В визуально неизмененных тканях экспрессия Е7 независимо от формы роста опухоли влияет на синтез эстрогенов, что выражается в увеличении уровня эстриола и эстрадиола, а также значительном преобладании тестостерона при неизменном уровне андрогенов в визуально неизмененных тканях экзофитных образований. При обоих вариантах роста опухоли экспрессия Е7 повышает уровень пролактина. Полученные результаты показывают, что визуально неизмененные ткани эндофитных и экзофитных опухолей так же как, и опухолевые ткани, различаются только степенью выраженности нарушений статуса гормонов под влиянием экспрессии Е7.
Подводя итог вышесказанному, можно констатировать, что при экспрессии белка Е7 изменение гормонального статуса в тканях опухоли независимо от варианта роста имеет однонаправленный характер, так же, как и в соответствующих визуально неизмененных тканях, и отличаются только степенью выраженности происходящих изменений. Экспрессия Е7 меняет гормоногенез в сторону усиления синтеза эстрогенов и андрогенов, стимулирует выработку ССГ и пролактина, вызывает прогестероновый дефицит во всех исследуемых образцах тканей. Особо следует выделить визуально неизмененную ткань экзофитных образований, менее подверженную влиянию экспрессии онкобелка Е7.
Рецензенты:
Каймакчи О.Ю., д.м.н., ассистент кафедры онкологии Ростовского государственного медицинского университета, г. Ростов-на-Дону;
Николаева Н.В., д.м.н., ассистент кафедры онкологии Ростовского государственного медицинского университета, г. Ростов-на-Дону.
Работа поступила в редакцию 14.10.2014.