Кровопотеря остается одной из сложных и актуальных проблем. Продолжаются дискуссии как о патогенезе симптомокомплекса кровопотери, так и о методах ее лечения.
Кровопотеря вызывает нарушения го-
меостаза, при этом особого внимания требуют процессы, характеризующие адаптивные возможности организма. Процесс адаптации к стрессорным факторам, в том числе к гипоксии, реализуется путем активации синтеза нуклеиновых кислот и белков в различных тканях, ответственных за адаптацию [8]. Известно, что печень играет центральную роль в осуществлении основных звеньев межуточного обмена, в обеспечении других органов и тканей пластическими и энергетическими веществами [6].
С целью коррекции гипоксии печени патогенетически целесообразно применение средств, стабилизирующих метаболизм и мембрану гепатоцита. В качестве такого вещества нами выбрана аскорбиновая кислота (АК) – это полифункциональное вещество с исключительно широким спектром антигипоксического действия [3]. Направленный транспорт лекарственных веществ в печень в аутологичных эритроцитарных контейнерах возможен благодаря их тропности к клеткам Купфера [9].
Цель исследования – оценить влияние аскорбиновой кислоты на адаптационные возможности печени в условиях гипоксии.
Материалы и методы исследования
Работа выполнена на белых беспородных крысах массой 240–280 г. Гипоксию вызывали кровопусканием через катетер [10]. Объем кровопотери составил 2 % от массы животного. Животные были разделены на следующие группы: 1-ая группа – интактные животные, 2-я группа – крысы с кровопотерей (материал для исследования брали через 6 и 24 ч после кровопотери), 3-я группа – контрольная (интактные крысы, получавшие АК путем направленного транспорта), 4-я группа – животные с кровопотерей, получавшие АК путем направленного транспорта. Получение эритроцитарных контейнеров (ЭК) с АК производилось методом гипотонического лизиса в модификации Т.П. Генинг [2]. ЭК с АК вводили внутривенно в дозах 25, 50 и 100 мг/кг однократно через 10 мин после кровопотери.
Общее содержание белка в сыворотке крови определяли унифицированным методом по биуретовой реакции [4]. Процентное содержание альбуминов и β-глобулинов в сыворотке крови определяли методом электрофореза на геле агарозы на аппарате Paragon фирмы Bechmen (США). Оценку электрофореграмм проводили с помощью денситометра. Статистическая обработка полученных данных производилась по t-критерию Стьюдента. Статистически значимыми считали различия с р < 0,05. Экспериментальные исследования проводились с соблюдением биоэтических правил.
Результаты исследования
и их обсуждение
Из данных нашего исследования, представленных в табл. 1, видно, что содержание общего белка в сыворотке крови крыс через 6 ч после кровопотери достоверно снижается на 13,11 %, а через 24 ч уже имеет тенденцию к нормализации.
Снижение белоксинтезирующей способности печени может быть вызвано несколькими причинами. В результате перераспределения органного кровотока кровоснабжение, в частности, печени по ее микроваскулярному руслу ограничивается, в том числе за счет артериоло-венулярного шунтирования. В результате чего в органе развивается вторичная тканевая гипоксия, уменьшаются энергетические ресурсы клетки, что приводит к разнообразным расстройствам функций печени [5].
Одним из ведущих патогенетических механизмов развития поражений печени при кровопотере является активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ). Образовавшиеся в процессе развития ПОЛ диеновые конъюгаты и малоновый диальдегид в больших концентрациях обладают выраженной цитотоксичностью, тем самым подавляют процессы гликолиза и окислительного фосфорилирования, ингибируют синтез белка, подавляют активность цитозольных и мембраносвязанных ферментов [1].
В содержании альбуминов в сыворотке крови прослеживается лишь тенденция к увеличению на обоих сроках исследования по сравнению с их содержанием в сыворотке крови интактных крыс.
В то же время содержание β-глобулинов достоверно увеличивается через 6 ч после кровопотери в 4,03 раза, через 24 ч – в 3,98 раза.
Таблица 1
Содержание общего белка, альбуминов и β-глобулинов в сыворотке крови
белых крыс в условиях кровопотери (М ± m, n = 12)
|
Показатель |
Условия эксперимента |
||
|
Интактные животные |
6 ч после кровопотери |
24 ч после кровопотери |
|
|
Общий белок, г/л |
70,8 ± 4,56 |
61,52 ± 4,41* |
66,44 ± 4,41 |
|
Альбумины, % |
47,53 ± 4,50 |
52,24 ± 6,71 |
49,96 ± 6,82 |
|
β-глобулины, % |
6,33 ± 0,51 |
25,49 ± 3.41* |
25,20 ± 2,94* |
Примечание: * – достоверность различий по отношению к интактным животным, достоверны при р < 0,05.
В табл. 2 показано, что однократное введение АК в дозе 25 мг/кг через 6 ч после кровопотери привело к достоверному повышению общего белка в сыворотке крови как по сравнению с интактными животными, так и по сравнению с животными с кровопотерей соответственно на 7,97 % и на 24,25 %. Через 24 ч содержание белка в сыворотке крови не отличалось от их содержания у интактных животных.
Таблица 2
Влияние адресной доставки аскорбиновой кислоты в печень в дозировках 25, 50,
100 мг/кг на содержание общего белка (г/л) в сыворотке крови белых крыс (М ± m, n = 12)
|
№ п/п |
Условия эксперимента |
Дозы аскорбиновой кислоты |
||
|
25 мг/кг |
50 мг/кг |
100 мг/кг |
||
|
1. |
Контроль |
69,50 ± 2,60 |
71,99 ± 4,52 |
75,90 ± 4,33* |
|
2. |
Направленный транспорт (6 ч) |
76,44 ± 2,22* ^ |
78,00 ± 4,47* ^ |
79,89 ± 4,88* ^ |
|
3. |
Направленный транспорт (24 ч) |
72,89 ± 1,83 ^ |
76,82 ± 4,05* ^ |
79,82 ± 2,97* ^ |
Примечание: * – достоверность различий по отношению к интактным животным, достоверны при р < 0,05; ^ – достоверность различий по отношению к животным с кровопотерей, достоверны при р < 0,05.
При введении АК в дозе 50 мг/кг животным с кровопотерей в сыворотке крови крыс наблюдалось достоверное повышение содержания общего белка как по сравнению с интактными животными, так и по сравнению с животными с кровопотерей. Так, через 6 ч его содержание повысилось на 10,17 %, а через 24 ч – на 8,5 % по сравнению с интактными животными. По сравнению с животными с кровопотерей его содержание достоверно повысилось через 6 ч на 29,79 %, а через 24 ч – на 15,62 %.
Как видно из данных табл. 2, однократное введение АК в дозе 100 мг/кг через 6 ч и через 24 ч после кровопотери способствует повышению уровня общего белка в сыворотке крови экспериментальных животных как по сравнению с интактными животными, так и по сравнению с животными с кровопотерей. Так, по отношению к содержанию общего белка у животных с кровопотерей их содержание в условиях коррекции через 6 ч достоверно повысилось на 29,86 %, а через 24 ч – на 20,14 %.
Исследование показало (табл. 3), что процентное содержание альбуминов через 6 ч и 24 ч после кровопотери при введении АК в дозе 25 мг/кг после включения в эритроцитарные контейнеры не достоверно отличалось от их содержания у интактных животных, но при этом имело тенденцию к повышению. По сравнению с данными животных с кровопотерей содержание альбуминов через 6 ч имело тенденцию к снижению, а через 24 ч осталось на том же уровне.
Введение АК в дозе 50 мг/кг ни через 6 ч, ни через 24 ч не вызывает достоверного изменения содержания альбуминов как по сравнению с интактными животными, так и по сравнению с данными животных с кровопотерей.
При введении АК в дозе 100 мг/кг животным после кровопотери содержание альбуминов через 6 ч достоверно повысилось на 14,53 %, а через 24 ч ‒ на 13,71 % по сравнению с животными с кровопотерей. По сравнению с интактными животными содержание альбуминов тоже достоверно повысилось на 25,88 %, а через
24 ч на 19,52 %.
Результаты исследования, представленные в табл. 4 показывают, что введение АК в дозе 25 мг/кг вызывает достоверное увеличение содержания β-глобулинов до 10,41 ± 1,36 %, что в 1,64 раза выше показателей интактных животных. Направленный транспорт в печень АК сохраняет повышенный уровень процентного содержания β-глобулинов в сыворотке крови крыс.
Введение АК в дозе 50 мг/кг в эритроцитарных носителях способствовало увеличению содержания β-глобулинов в 3,81 раза по сравнению с их содержанием у интактных животных.
Изучение влияния АК в дозе 50 мг/кг
показало существенное (р < 0,05) изменение в содержании β-глобулинов на всех изучаемых сроках по сравнению с интактными животными. Так, через 6 ч процентное содержание β-глобулинов составило 27,17 ± 1,59 % (р < 0,05), а через 24 ч – 28,94 ± 1,66 % (р < 0,05), что соответственно в 4,29 и 4,57 раз выше показателей интактных животных. По сравнению с показателями животных с кровопотерей содержание β-глобулинов через 6ч имело тенденцию к повышению, а через 24 ч достоверно повысилось на 14,84 % с 25,20 ± 2,94 до 28,94 ± 1,60 %.
Таблица 3
Влияние адресной доставки АК в печень в дозировках 25, 50, 100 мг/кг на процентное содержание альбуминов (%) в сыворотке крови белых крыс (М ± m, n = 12)
|
№ п/п |
Условия эксперимента |
Доза аскорбиновой кислоты |
||
|
25 мг/кг |
50 мг/кг |
100 мг/кг |
||
|
1. |
Контроль |
49,29 ± 2,02 |
47,79 ± 5,84 |
56,24 ± 1,95* |
|
2. |
Направленный транспорт (6 ч) |
49,30 ± 1,51 |
46,53 ± 3,24 |
59,83 ± 3,43*^ |
|
3. |
Направленный транспорт (24 ч) |
49,34 ± 3,57 |
46,93 ± 1,04 |
56,81 ± 2,56*^ |
Примечание: * – достоверность различий по отношению к интактным животным, достоверны при р < 0,05; ^ – достоверность различий по отношению к животным с кровопотерей, достоверны при р < 0,05.
При однократном введении АК в эритроцитарных контейнерах в дозе 100 мг/кг
экспериментальным животным после кровопотери наблюдается тенденция к повышению содержания β-глобулинов через 6 ч после кровопотери, а через 24 ч – наоборот, тенденция к снижению их содержания по сравнению с животными с кровопотерей. По сравнению с интактными животными через 6 ч содержание β-глобулинов повысилось в 4,45 раза, а через 24 ч – в 3,81 раза по сравнению с ин-
тактными животными.
Можно полагать, что эффективность АК в дозе 100 мг/кг связана с оказываемым ею мембраностабилизирующим и антиоксидантным действием в гепатоцитах. АК как донор электронов может отдавать их свободным радикалам и снижать их реактивность. Кроме того, аскорбиновая кислота в гетерогенных системах, содержащих липидную и водную фазу, выводит радикалы из легкоокисляющейся липидной фазы в водную [7].
Таблица 4
Влияние адресной доставки АК в печень в дозировках 25, 50, 100 мг/кг на процентное содержание β-глобулинов (%) в сыворотке крови белых крыс (М ± m, n = 12)
|
№ п/п |
Условия эксперимента |
25 мг/кг |
50 мг/кг |
100 мг/кг |
|
1. |
Контроль |
10,41 ± 1,36* |
24,13 ± 1,69* |
25,79 ± 1,27* |
|
2. |
Направленный транспорт (6 ч) |
24,31 ± 0,79* |
27,17 ± 1,59* |
28,14 ± 4,65* |
|
3. |
Направленный транспорт (24 ч) |
24,71 ± 2,93* |
28,94 ± 1,60*^ |
24,13 ± 2,63* |
Примечание: * – достоверность различий по отношению к интактным животным, достоверны при р < 0,05; ^ – достоверность различий по отношению к животным с кровопотерей, достоверны при р < 0,05.
Выводы
1. Кровопотеря приводит к изменениям показателей белкового обмена в крови крыс: снижается уровень общего белка, прослеживается тенденция к увеличению уровня альбуминовой фракции и увеличивается уровень β-глобулинов.
2. Применение направленного транспорта АК в печень во всех изучаемых дозах позволило увеличить адаптационные возможности органа к условиям гипоксии на обоих сроках исследования.
3. Использование эритроцитарных контейнеров с АК в дозе 100 мг/кг позволило максимально оптимизировать адаптационные возможности печени, а именно повысить уровень общего белка, увеличить долю наиболее лабильной фракции – альбуминов, сохранить повышенный уровень содержания β-глобулинов на обоих изученных сроках.
Рецензенты:Каталымов Л.Л., д.б.н., профессор кафедры анатомии, физиологии и гигиены человека и животных, ФГБОУ ВПО «Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова», г. Ульяновск;
Любин Н.А., д.б.н., профессор, зав. кафедрой морфологии, физиологии и патологии животных, ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина», г. Ульяновск.