Кролик является самым распространенным объектом иммунологических опытов, обладает высокореактивной иммунной системой и достаточно пластичной тканью лимфатических узлов, способной на незначительные воздействия отвечать заметными морфологическими сдвигами. Лимфатические узлы этого животного сложно устроены, их структура достаточно близка к таковой у человека [1, 7, 8].
Метаболическая функция лимфатических узлов ‒ это возможное участие их в обмене жиров, витаминов, белков, в частности гемоглобина. Освобождая внутреннюю среду организма от избытка воды, белков, жиров, бактерий, продуктов распада клеток, постоянно пополняя запасы лимфоцитов и иммуноцитов, лимфатические узлы принимают активное участие в поддержании гомеостаза. Кроме того, в литературе указывается на их влияние на процессы свертывания крови путем образования прокоагулянтов и фибринолитических веществ [7, 8].
С гемопоэтической функцией лимфатических узлов тесно связана функция иммунопоэза – образование плазматических клеток и выработка антител. Рядом исследователей показано, что в лимфатических узлах образуются глобулины [3, 4, 5].
В рамках анатомического принципа связи организма с внешней средой предусматривается изучение морфологии лимфатического узла с учетом воздействия как естественных, так и дестабилизирующих факторов внешней среды.
Кролики по сравнению с другими животными наиболее подвержены стрессовому состоянию в результате отъема, перегруппировок, транспортировки, перемещений, технологических приемов и недостаточной физической активности животных [3, 7, 8].
Ведущим эустрессом для животных является длительная транспортировка, адаптация к новым условиям содержания и кормления. Основными признаками являются потери массы тела в период транспортировки, а в последующем угнетение роста. Животные беспокоятся, часто возникает «транспортная лихорадка». Во время перевозки повышаются мышечный тонус, диурез и дефекация, увеличиваются рефлекторная возбудимость и потоотделение. В результате – общая дегидратация организма, возникает гипоксия мышечных и паренхиматозных тканей. Все это ведет к резкой интенсификации катаболизма. Изменения в организме обнаруживают в течение 20–35 дней, а иногда и дольше [1, 2, 6, 9]. Транспортный стресс часто провоцирует возникновение желудочно-кишечных и респираторных инфекций и незаразных болезней [2, 9]. При развитии патологических процессов в организме лимфатические узлы часто подвергаются изменениям и отвечают заметными морфологическими сдвигами, поскольку в них с током лимфы поступают из ближайших первичных воспалительных очагов возбудители инфекций и токсические продукты [1, 7, 8]. Поэтому актуальным нам представлялось исследование морфологии лимфатических узлов кролика.
Целью настоящего исследования явилось изучение строения функционально активных зон лимфатических узлов кролика в условиях длительной транспортировки с предварительным введением в организм гомеопатического препарата «Фоспасим».
Материалы и методы исследования
Материалом для исследования послужили гистологические препараты лимфатических узлов, а также физиологические показатели 40 кроликов Калифорнийской породы весом 3,0–3,5 кг, в возрасте 4 мес., опытной и контрольной групп, которые транспортировались в течение 24 часов на расстояние 840 км в 2-ярусных сетчатых клетках в авторефрижераторе при температуре +14 °С. Температура воздуха в месте погрузки составляла –22 °С, в месте выгрузки –14 °С. Данная ситуация явилась для кроликов физическим и психическим стрессом.
В исследовании приняли участие 2 группы кроликов по 20 голов в каждой, выровненных по возрасту, живой массе, физиологическому состоянию.
Первой опытной группе вводили внутримышечно «Фоспасим» (ООО «Хелвет») 0,4 мл/гол. дважды: перед транспортировкой и после выгрузки в первый день адаптации, далее перорально по 12–13 капель ежедневно, в течение 7 дней. Контрольная группа кроликов перевозилась без участия расслабляющего средства в идентичных условиях. После стрессорного воздействия животные были забиты щадящим методом (эфирный наркоз), у них взяты срезы лимфатического узла брыжейки. После фиксации кусочков в 10 % формалине, с последующей проводкой по спиртам и заливкой в парафин, срезы органов толщиной 7 мкм окрашивали современным гистологическим методом (гематоксилин-эозином). Исследование срезов лимфатических узлов проводили на светооптическом микроскопе «Биолан» при увеличении: окуляр ×10 объектив 20×40. Статистическая обработка полученных данных включала подсчет среднеарифметических показателей абсолютных и относительных величин (Х), и их ошибки (Sx). Достоверность отличий средних величин оценивалась методом доверительных интервалов по критерию t-Стъюдента. Всего приготовлено 350 препаратов.
Результаты исследования и их обсуждение
По истечении стрессорного воздействия кролики опытной группы, в сравнении с контрольной находились в более спокойном состоянии, позволяли манипуляции, связанные с выгрузкой, поедали корм. Кролики контрольной группы находились в состоянии возбуждения, оказывали активное сопротивление при выгрузке, температура тела была повышенная (41,9 ± 0,18 °C), сердцебиение учащенное (163 ± 2,1).
При клиническом исследовании кроликов опытной группы на 7 день адаптации отметили, что паховые лимфатические узлы хорошо прощупываются, упругой консистенции, в объеме не увеличены, подвижные, безболезненные, не горячие, с гладкой поверхностью. Однако у 87 % кроликов контрольной группы лимфатические узлы визуально увеличены, плотные на ощупь, болезненны, малоподвижны, температура кожи над узлами несколько повышена.
Рис. 1. Корковое вещество лимфатического узла опытной группы животных. Окраска гематоксилин-эозин. Микрофотография. Ок. 10, об. 40
При патологоанатомическом вскрытии установили, что в опытной группе лимфатический узел брыжейки имеет четко очерченные края, на разрезе сочные, бледно-бежевого цвета, капсула не напряжена, корковый и мозговой слои хорошо различимы. В контрольной же группе лимфатический узел цвета слоновой кости, капсула напряжена, что может свидетельствовать о наличии инфекционного, иммунного или опухолевого заболеваний.
На морфологическом уровне поверхность лимфатического узла покрыта соединительнотканной капсулой, от которой внутрь узла отходят трабекулы. Строма, структурная основа лимфатического узла, образована ретикулярной соединительной тканью. В состав стромы входят также фагоцитирующие клетки – макрофаги, представленные в лимфатических узлах несколькими разновидностями.
На микропрепарате органа опытной группы кроликов выделяются две основные зоны: корковое вещество, в котором различают поверхностную часть и зону глубокой коры (паракортикальную зону) и мозговое вещество (рис. 1).
На микропрепарате контрольной группы мозговое вещество образовано ветвящимися и анастомозирующими тяжами лимфоидных клеток, в которые мигрируют B-лимфоциты из поверхностной коры (рис. 2).
Рис. 2. Мозговые тяжи и промежуточные синусы лимфатического узла контрольной группы кроликов. Окраска гематоксилин-эозин. Микрофотография. Ок.10, об. 40
Внутреннее пространство органа содержит скопления лимфоидной ткани. В области поверхностной коры, ближе к капсуле, располагаются лимфатические узелки (фолликулы). На окрашенных препаратах они имеют более светлую центральную часть – герминативный центр, т.е. это вторичный узелок с центром размножения в котором происходит антигензависимая пролиферация и дифференцировка B-лимфоцитов. Поверхностная, более тёмная на препаратах часть узелка – лимфоидная корона, содержит большое количество мелких, плотно расположенных лимфоцитов (рис. 3).
Рис. 3. Плотное расположение лимфоцитов коркового вещества лимфатического узла контрольной группы кроликов. Окраска гематоксилин-эозин. Микрофотография. Ок. 10, об. 40
Следовательно, данный лимфатический узел находится в состоянии иммунного ответа, т.е. притекающая лимфа приносит в лимфатический узел чужеродные антигены. Протекая по синусам мозгового вещества, лимфа обогащается антителами, которые продуцируются плазматическими клетками мозговых тяжей. В синусах (субкапсулярный, промежуточный и мозговой) лимфоциты распределяются диффузно. В межузелковой зоне лимфоциты и макрофаги располагаются очень плотно и тем самым обеспечивают слияние фолликул между собой (рис. 3).
От глубокой коры в мозговое вещество отходят мозговые тяжи также с большим количеством лимфоидных клеток. Лимфоидные клетки заполняют и синус (рис. 4).
Рис. 4. Плотное расположение лимфоцитов коркового вещества лимфатического узла контрольной группы животных. Окраска гематоксилин-эозин. Микрофотография. Ок. 10, об. 40
Как видно, лимфоциты, продуценты антител, накапливаются в мозговом веществе узла, откуда вместе с макрофагами будут рекрутироваться обратно в циркуляцию через лимфососуды и венулы. Таким образом, лимфатический узел – периферический орган иммуногенеза, а вторичные реактивные фолликулы появились в лимфоузле как результат идущего иммунного ответа у кроликов контрольной группы при адаптации во время транспортировки.
Выводы
Стресс умеренной интенсивности при транспортировке вызывает перераспределение лимфоцитов. В период мобилизации клеток лимфоциты обладают высокой способностью к иммунному ответу. Введение в организм кролика гомеопатического препарата «Фоспасим» оказывает антипсихотическое, антиневротическое действие (снижение агрессивности, пугливости), нормализует эмоционально-психологическое состояние при длительной транспортировке и в процессе адаптации. Следовательно, на основании проведенных нами экспериментальных исследований мы полагаем, что можно рекомендовать введение гомеопатического препарата «Фоспасим» для повышения адаптационных способностей организма кроликов при транспортировке на длительное расстояние. В данном случае внутримышечное введение препарата в дозе 0,4 мл/гол. перед транспортировкой и после выгрузки в первый день адаптации, далее перорально по 12–13 капель ежедневно, в течение 7 дней.
Рецензенты:
Андреева А.В., д.б.н., профессор, заведующая кафедрой инфекционных болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы, ФГБОУ ВПО «Башкирский ГАУ», г. Уфа;
Хисматуллина З.Р., д.б.н., доцент, заведующая кафедрой морфологии, физиологии человека и животных, ФГБОУ ВПО Башкирский ГУ (БГУ), г. Уфа.
Работа поступила в редакцию 21.06.2013.