Воспаления придатков матки продолжают занимать одно из ведущих мест в структуре гинекологических заболеваний. Их значимость обусловлена прежде всего тем, что эти заболевания затрагивают органы и ткани, относящиеся к репродуктивной системе и оказывают непосредственное влияние на репродуктивную функцию женщины. В современных условиях воспалительные процессы внутренних половых органов характеризуются рядом особенностей,проявляющихся изменением клинической картины в сторону стёртых форм и атипического течения, нарушением эндокринной регуляции и большим числом серьзных осложнений в виде менструальной дисфункции, бесплодия, внематочной беременности и др. Предметом многочисленных исследований при остром и хроническом сальпингооофорите стало изменение показателей иммунной
системы [1, 2, 7].
Характер и развитие воспалительного процесса значительным образом определяют клетки макрофагальной системы, прежде всего моноциты крови и тканевые макрофаги. Вариант течения воспалительного процесса зависит от своевременности и полноценности их включения в патологический процесс и переключении нейтрофильной реакции на реакцию моноцитарно-макрофагальных клеток с выделением их конститутивного фермента - лизоцима [2, 4]. При нарушении синтеза и секреции лизоцима непереваренные продукты фагоцитоза могут длительное время оставаться во вторичных лизосомах, а повышение содержания лизосом в моноцитах, связаное с их активацией, влечет за собой участие этих клеток в деструктивных процессах в тканях. Недостаточность лизосомного аппарата макрофагальных клеток играет роль и в патогенезе спаечного процесса в половых органах [4].
Активация клеток системы макрофагов - важный процесс их включения в биологические реакции организма - воспаление, иммунный ответ, процессы регенерации [1, 2, 4]. При активации макрофагов возникает усиление синтетических, секреторных процессов в клетках, в частности, происходит повышение выхода лизосомных ферментов из клеток, усиление выработки интерликина-8, уровень которого в крови заметно повышается [5, 7, 9]. Секреция лизосомных ферментов сопряжена с состоянием стабильности лизосомных мембран клеток: при лабилизации лизосомных мембран происходит повышение выхода ферментов, при стабилизации - снижение [6].
Цель исследования - определить сопряженность состояния лизосомных мембран, секреторно-синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с процессом активации этих клеток по уровню провоспалительного цитокина интерлейкина-8 у женщин с острым и хроническим сальпингооофоритом.
Материал и методы исследования
Проведено обследование 38 женщин с острым и хроническим сальпингооофоритом в возрасте от 20 до 40 лет (средний возраст 30 ± 3,2 года). Больные находились на лечении в гинекологическом отделении городской клинической больницы № 1 г. Владивостока. Контрольную группу составили 14 условно здоровых женщин, обратившихся к врачу гинекологу за консультацией. На все исследования было получено информированное согласие женщин.
Диагноз воспалительного процесса был выставлен на основании клинико-лабораторных и инструментальных методов обследования, согласно принятым стандартам.
Выделение моноцитов крови проводилось на градиенте плотности фиколл-верографина центрифугированием крови в течение 30 минут при 400 G с последующим отсасыванием микропипеткой кольца градиента. Клетки прикреплялись к поверхности стекла в течение 60 минут при температуре 37 ºС.
Перитонеальные макрофаги получали из суспензии, взятой методом пункций заднего влагалищного свода, так же выделяли прикреплением клеток к поверхности стекла.
Концентрацию клеток считали в камере Горяева и доводили стерильным физиологическим раствором до 6·106 кл/мл. Определение стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов с расчетом показателя стабильности (ПСЛМ) проводили методом культивирования выделенных клеток в среде 199 с добавлением 0,5 % стерильного L-глутамина и 2,5 % смешанной человеческой сыворотки, прогретой в течение 30 мин при 56 ºС в течение 12-15 часов при 37 ºС. Микрометодом проводили определение секретированного лизоцима (Lсекр), а после 4-6-кратного замораживания-оттаивания культивируемых клеток - общего лизоцима (Lобщ - секретированный плюс внутриклеточный). На основании полученных результатов секретированного и общего лизоцима высчитывали ПСЛМ по формуле: ПСЛМ = Lсекр/Lобщ·100 %. Повышение ПСЛМ выше оптимального значения (53-58 %) расценивалось как лабилизация лизосомных мембран, снижение этого показателя - как стабилизация мембран. По результатам оценки разницы (Lобщ) после и до культивирования, определяли количество синтезированного лизоцима (Lсинт) [6].
Проведенные ранее нами исследования выявили выраженные колебания ПСЛМ в зависимости от фазы менструального цикла. Наибольший подъем показателя стабильности лизосомных мембран наблюдался в день предполагаемой овуляции с последующим снижением до оптимального значения (53-58 %) на 19-21 день цикла. Поэтому обследование женщин проводилось во вторую фазу менструального цикла.
Определение интерлейкина-8 в супернатанте культивированных клеток (оценивалась секреция интерлейкина-8 моноцитами крови) проводилось методом сендвич-варианта твердофазного иммуноферментного анализа с использованием реактивов фирмы «R&D Diagnostics Inc.» (США).
Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием пакета программ «Statistica 6» с применением стандартных методов вариационной статистики и критерия Манна-Уитни для оценки статистически значимых различий. Различие считалось достоверным при р < 0,05.
Результаты исследований и их обсуждение
В результате проведенного исследования выявлено, что у здоровых женщин уровень секреции интерлейкина-8 моноцитами крови составляет 90-140 пг/мл/106кл. При остром воспалительном процессе в придатках матки происходит возрастание уровня секреции интерлейкина-8 до 300-400 пг/мл/106кл, а при хроническом воспалении - до 1100-1350 пг/мл/106кл, что соответствует различной степени активации клеток-продуцентов интерлейкина.
Состояние стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов, их секреторная и синтетическая активность при разном уровне секреции интерлейкина-8 моноцитами крови также имеют различие у здоровых женщин и у женщин с острым и хроническим сальпингооофогитом.
В табл. 1 представлены результаты исследования показателя стабильности лизосомных мембран у женщин с нормальным уровнем интерлейкина-8 (здоровые женщины), повышенным уровнем (больные острым сальпингооофоритом) и высоким уровнем (больные хроническим сальпингооофоритом).
Как видно из полученных данных, при остром сальпингооофорите наряду с увеличением секреции интерлейкина-8 происходит повышение ПСЛМ моноцитов крови и перитонеальных макрофагов по сравнению с ПСЛМ здоровых женщин с нормальным уровнем секреции интерлейкина-8 (p < 0,05). Еще больше по сравнению со здоровыми женщинами возрастает ПСЛМ моноцитов/макрофагов у женщин с хроническим сальпингооофоритом, имеющим высокий уровень секреции интерлейкина-8 (p < 0,01).
Параллельно с лабилизцией лизосомных мембран моноцитов крови перитонеальных макрофагов происходит увеличение секреции клеточного лизоцима (табл. 2). При этом наиболее выраженная секреция лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами наблюдается у женщин с хроническим сальпингооофоритом, у которых наблюдается более высокий уровень секреции моноцитами крови интерлейкина-8.
Таблица 1
Показатель стабильности лизосомных мембран моноцитов крови и перитонеальных макрофагов у здоровых и больных женщин
|
Группы сравнения |
Количество женщин, n |
ПСЛМ в % моноцитов (M ± m) |
ПСЛМ в % |
|
Здоровые женщины p1 |
14 |
53,8 ± 1,3 |
59,6 ± 1,4 |
|
Женщины с острым сальпингооофоритом p2 |
18 |
55,7 ± 0,3 p1 - p2* |
62,3 ± 0,6 p1 - p2* |
|
Женщины с хроническим сальпингооофоритом p3 |
20 |
62,6 ± 0,9 p1 - p3** p2 - p3* |
66,5 ± 1,6 p1 - p3*** p2 - p3* |
Примечание. Достоверность различий ПСЛМ между сравниваемыми группами: * - p < 0,05; ** - p < 0,01; *** - p < 0,001.
Таблица 2
Уровень секреции лизоцима (Lсекр) моноцитами крови и перитонеальными макрофагами
у здоровых и больных женщин
|
Группы сравнения |
Количество женщин, n |
Lсекр мкг/мл, |
Lсекр мкг/мл, макрофагов (M ± m) |
|
Здоровые женщины p1 |
14 |
0,76 ± 0,030 |
0,90 ± 0,070 |
|
Женщины с острым сальпингооофоритом p2 |
18 |
0,95 ± 0,050 p1 - p2** |
1,2 ± 0,050 p1 - p2** |
|
Женщины с хроническим сальпингооофоритом p3 |
20 |
1,3 ± 0,1 p1 - p3***_ p2 - p3**_ |
1,7 ± 0,2 p1 - p3*** p2 - p3* |
Примечание. Достоверность различия Lсекр между сравниваемыми группами:
* - p < 0,05; ** - p < 0,01; *** - p < 0,001.
Наряду с повышением интерлейкина-8 у женщин с острым и хроническим сальпингооофоритом повышается и синтез лизоцима моноцитами/макрофагами (табл. 3). Но имеются заметные различия между синтезом лизоцима и уровнем интерлейкина-8 у больных острым и хроническим воспалительным процессом. Если при хроническом сальпингооофорите отмечается выраженное повышение секреции интерлейкина-8 моноцитами крови по сравнению с уровнем секреции интерлейкина-8 при остром воспалении (p < 0,05), то синтез лизоцима моноцитами/макрофагами при хроническом воспалительном процессе возрастает незначительно и практически находится на одном уровне с синтезом лизоцима клетками женщин с острым сальпингооофоритом (p > 0,05).
Таблица 3
Уровень синтеза лизоцима (Lсинт) моноцитами крови и перитонеальными макрофагами
у здоровых и больных женщин
|
Группы сравнения |
Количество женщин, n |
Lсинт мкг/мл, |
Lсинт мкг/мл, |
|
Здоровые женщины p1 |
14 |
0,5 ± 0,030 |
0,70 ± 0012 |
|
Женщины с острым сальпингооофоритом p2 |
18 |
0,8 ± 0,090 p1 - p2** |
1,0 ± 0,1 p1 - p2** |
|
Женщины с хроническим сальпингооофоритом p3 |
20 |
0,3 ± 0,060 p1 - p3** |
0,4 ± 0,07 p1 - p3** |
Примечание. Достоверность различия Lсинт между сравниваемыми группами: * - p < 0,01; ** - p < 0,001.
Оценивая полученный результат, с точки зрения изменения функционального состояния моноцитов/макрофагов, у женщин при остром и хроническом сальпингооофорите выявлены как общие закономерности, так и существенные различия. Как при остром, так и при хроническом процессе определена активация синтеза и секреции исследованных медиаторов воспаления, сопряженная с лабилизацией лизосомных мембран. При хроническом сальпингооофорите по сравнению с острым процессом отмечен более высокий уровень секреции интерлейкина-8 моноцитами крови. Гиперпродукция интерлейкина-8 моноцитами крови происходит одновременно с процессом выраженной лабилизации лизосомных мембран и отсутствием дополнительного повышения секреции лизосомного фермента лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами. По-видимому, данные внутриклеточные процессы связаны с разной активацией моноцитов/макрофагов при остром и хроническом воспалении.
Таким образом, при остром сальпингооофорите, наряду с повышением уровня секреции интерлейкина-8 моноцитами крови, происходят лабилизация лизосомных мембран, повышение секреции и синтеза лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами.
При хроническом сальпингооофорите имеет место гиперсекреция интерлейкина-8 моноцитами крови, выраженная лабилизация лизосомных мембран, высокий уровень секреции лизоцима моноцитами крови и перитонеальными макрофагами при относительно невысоком синтезе этого фермента. Неоптимальное повышение активности моноцитов/макрофагов с нарушением их секреторно-синтетических процессов при воспалении женских половых органов может привести к хронизации процесса, частым обострениям воспаления, отсутствию эффекта от проводимой антибактериальной терапии. Правильно подобранная иммунокоррегирующая терапия под контролем уровня секреции интерлейкина-8 моноцитами крови, секреторно-синтетической активности моноцитов крови и перитонеальных макрофагов при остром и хроническом сальпингооофорите может благоприятно сказаться на исходе заболевания с полным восстановлением репродуктивного здоровья женщины.
Рецензенты:
Лучанинов Э.В., д.м.н., главный врач ГБУЗ «Краевой диагностический центр», г. Владивосток;
Плеханова Н.Г., д.б.н., зав. лабораторией патоморфологии и электронной микроскопии НИИ эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, г. Владивосток.
Работа поступила в редакцию 07.07.2011.